四種后睪科吸蟲的遺傳多態(tài)性研究.pdf

1、該試驗(yàn)以臺灣次睪吸蟲(Metorchis taiwanensis)、鴨對體吸蟲(Amphimerus anatis)、華支睪吸蟲(Clonorchis sinensis)及截形微口吸蟲(Microtrema truncatum)為材料,應(yīng)用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA技術(shù)對這四種后睪科吸蟲基因組DNA進(jìn)行遺傳多態(tài)性研究.試驗(yàn)采用改進(jìn)的酚/氯仿法進(jìn)行基因組DNA的提取,結(jié)果表明所提DNA完整,沒有斷裂或降解,大小均在23.1kb左右,經(jīng)DNA純度

2、鑒定OD<,260>/OD<,280>值在1.8左右,符合要求;試驗(yàn)對RAPD擴(kuò)增條件進(jìn)行優(yōu)化,對模板、Taq酶、dNTP的濃度、退火溫度及退火時間等影響因素進(jìn)行梯度篩選,經(jīng)過反復(fù)的試驗(yàn),確定了RAPD最佳擴(kuò)增體系及反應(yīng)程序.采用該擴(kuò)增體系和程序,在嚴(yán)格控制反應(yīng)條件、規(guī)范操作,保證反應(yīng)條件前后一致的前提下,獲得了穩(wěn)定的、可重復(fù)的結(jié)果.試驗(yàn)從40條隨機(jī)引物中篩選出20條多態(tài)性及重復(fù)性好的引物,共擴(kuò)增出310個DNA譜帶,其中多態(tài)帶為307

3、條,多態(tài)率為99.03﹪.單個引物擴(kuò)增片段數(shù)在6~23之間,擴(kuò)增出的條帶大小在202~2460bp之間,擴(kuò)增條帶最多的引物是S22,為23條,最少的引物是S477,為6條.引物S130、S232和S341各擴(kuò)增出一條共同條帶;用AVERAGE(平均距離法)進(jìn)行遺傳距離聚類分析,結(jié)果表明:鴨對體吸蟲和華支睪吸蟲的遺傳距離為0.7944,兩者親緣關(guān)系最近,最先聚在一起,截形微口吸蟲與臺灣次睪吸蟲的遺傳距離最大,為0.9306,親緣關(guān)系最遠(yuǎn),