兩種來源乳桿菌的分離鑒定及遺傳多態(tài)性研究.pdf

1、本研究的主要研究內(nèi)容為分離植物源和動物源的乳桿菌，并對其進(jìn)行鑒定和遺傳多態(tài)性分析。 本研究主要取得如下研究結(jié)果： 1.乳桿菌的分離純化及菌種保存以自然發(fā)酵的優(yōu)良東北酸菜和豬腸道內(nèi)容物為樣品，以改良MRS培養(yǎng)基為分離培養(yǎng)基，厭氧條件培養(yǎng)，對這兩種來源的乳桿菌進(jìn)行分離、純化以及菌株保藏。并通過形態(tài)學(xué)特征和過氧化氫酶試驗，初步確定從酸菜樣品和豬腸道樣品中分別分離得到乳桿菌39株和29株。 2.乳桿菌的生理生化鑒定通過明

2、膠液化試驗、吲哚試驗、H2S產(chǎn)生試驗、硝酸鹽還原試驗進(jìn)一步驗證所分離的菌株，結(jié)果顯示從酸菜樣品和豬腸道樣品分離得到的菌株中分別有34和25株屬于乳桿菌屬；對分離自酸菜的L1～L10株，以及分離自豬腸道的L10～L20株進(jìn)行糖發(fā)酵實(shí)驗，通過它們對單糖、二糖、多糖以及糖苷和糖醇類等碳水化合物的利用情況初步確定其種。 3.利用16SrDNA的序列聚類分析鑒定乳桿菌使用一對乳酸菌特異性引物擴(kuò)增分離株L1～L20的16srDNA序列，得到

3、大小為1500bp左右的16SrDNA片段，然后進(jìn)行測序。將分離株的測序結(jié)果與參比菌株的序列進(jìn)行比對，得出他們之間的相似百分比，同時結(jié)合糖發(fā)酵結(jié)果確定這20株菌為：干酪乳桿菌1株、短乳桿菌4株、棒狀乳桿菌1株、植物乳桿菌3株和米酒乳桿菌1株;羅伊氏乳桿菌4株、約氏乳桿菌2株、嗜酸乳桿菌2株、發(fā)酵乳桿菌1株、唾液乳桿菌1株。 4.利用PCR-RFLP技術(shù)研究乳桿菌的遺傳多態(tài)性用3種限制性內(nèi)切酶XbaI、MspI和AluI分別消化分

4、離株L1～L20的16SrDNA,其中MspI酶和AluI酶產(chǎn)生豐富的酶切圖譜，將L1～L20分成了10個遺傳型，表明分離株具有遺傳多態(tài)性特征。 5.利用PCR-DGGE技術(shù)區(qū)分不同種的乳桿菌使用一對乳酸菌的特異性引物擴(kuò)增L1～L20的V7～V8高可變區(qū)，變性梯度凝膠電泳的結(jié)果證明這種方法能夠區(qū)分不同種的分離株，其結(jié)果與傳統(tǒng)方法以及16SrDNA的序列聚類分析的結(jié)果相一致。 本研究從兩種來源樣品中分離得到59株乳桿菌，并