健康婦女陰道乳桿菌的分離及鑒定.pdf

1、目的:從健康體檢婦女生殖道中分離乳桿菌，為開發(fā)復(fù)方益生菌制劑提供新型菌株并為臨床通過表達(dá)各種重組乳桿菌以治療女性生殖系統(tǒng)疾病尋找理論依據(jù)做好前期準(zhǔn)備工作。
　　 方法：采用傳統(tǒng)方法鑒定乳桿菌，包括：革蘭氏染色陽性、過氧化氫酶試驗(yàn)陰性、菌體形態(tài)為桿狀的菌株可初步確定為乳桿菌；再通過生長溫度試驗(yàn)(15℃，45℃)、運(yùn)動(dòng)性試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)、吲哚(靛基質(zhì))試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)將疑似株菌鑒定為乳桿菌屬；碳水化合物發(fā)酵產(chǎn)酸試驗(yàn)

2、對(duì)乳桿菌進(jìn)行種的鑒定。進(jìn)一步篩選出產(chǎn)生過氧化氫的優(yōu)勢(shì)菌株，并運(yùn)用16SrRNA序列分析方法，對(duì)其進(jìn)行基因型鑒定。并對(duì)優(yōu)勢(shì)菌進(jìn)行初步的性能鑒定試驗(yàn)，其中包括：生長試驗(yàn)、不同培養(yǎng)時(shí)間發(fā)酵液pH的變化情況、菌株對(duì)溫度的敏感性試驗(yàn)、耐酸性菌株的初步篩選、乳桿菌體外拮抗試驗(yàn)、抗生素敏感實(shí)驗(yàn)、代謝產(chǎn)物的熱穩(wěn)定性試驗(yàn)。此外對(duì)優(yōu)勢(shì)菌株進(jìn)行質(zhì)粒的檢測(cè)。
　　 結(jié)果：從18名體檢女性陰道分泌物內(nèi)分離純化得到11株菌，檢出率為61.1％。11株菌鑒定

3、得到5種乳桿菌，分別為嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)4株，格氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)3株，詹氏乳桿菌(Lactobacillus jensenii)2株，卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)、唾液乳桿菌(Lactobacillus salivaius)各1株。通過試驗(yàn)得到1株產(chǎn)生過氧化氫的優(yōu)勢(shì)乳桿菌，并通過分子生物學(xué)技術(shù)得出該菌株與卷曲乳桿菌的同源性