轉(zhuǎn)RyR2基因致SK2通道功能變化治療老齡房顫犬的機(jī)制研究.pdf

1、目的:探討轉(zhuǎn)RyR2基因致SK2通道功能變化治療老齡性房顫犬的機(jī)制。
　　方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分組，假手術(shù)組（A組）7只，僅植入起搏電極，不行心房快速起搏。模型組植入起搏電極，行心房快速刺激8周后，將造模成功的房顫組隨機(jī)分為兩個(gè)亞組（B組和C組），每組7只。假手術(shù)組（A組）:經(jīng)胸心包腔注射500μl生理鹽水后仍不行心房快速起搏。AAV1/EGFP+房顫組（B組）:快速心房起搏8周后經(jīng)胸心包腔內(nèi)注射500μl攜帶EGFP（綠色熒光蛋白

2、）基因的腺相關(guān)病毒溶液后繼續(xù)行心房快速起搏14天。AAV1/RyR2-EGFP+房顫組（C組）:快速心房起搏8W周后經(jīng)胸心包腔內(nèi)注射500μl攜帶RyR2基因的腺相關(guān)病毒溶液后繼續(xù)行心房快速起搏14天。持續(xù)快速左心耳起搏建立慢性房顫犬模型，測(cè)定兩組心房和肺靜脈各部位ERP變化和HE染色和電鏡觀察心肌組織病理組織和超微結(jié)構(gòu)改變。然后采用免疫組化法，RT-PCR和Western blot檢測(cè)RyR2和SK2基因和蛋白變化。
　　結(jié)果:

3、1.手術(shù)成功并順利完成實(shí)驗(yàn)。模型組10只犬經(jīng)持續(xù)快速左心耳起搏8周，均出現(xiàn)典型的心房顫動(dòng)心電圖改變，ERP隨著時(shí)間明顯縮短。超微結(jié)構(gòu)顯示:肌溶解，肌小節(jié)的喪失常位于核周其內(nèi)可見(jiàn)肌小節(jié)碎片。肌小節(jié)缺失處可見(jiàn)大小和形狀發(fā)生典型改變的線粒體。線粒體變長(zhǎng)。閏盤(pán)扭模糊和不連續(xù)。2.經(jīng)胸心包腔注射AAV1/RyR2-EGFP基因轉(zhuǎn)染后，左、右心房冰凍切片均顯示大量綠色熒光蛋白表達(dá)，呈強(qiáng)陽(yáng)性。免疫組化檢測(cè)犬左心房RyR2和SK2表達(dá)顯示:可見(jiàn)大量棕色