低氧對A549細(xì)胞糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)的影響.pdf

1、背景： 低氧是呼吸系統(tǒng)疾病，如支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)等常伴發(fā)的病理生理過程，低氧可以影響氣道的慢性炎癥進(jìn)程及氣道重塑。糖皮質(zhì)激素(GC)是呼吸系統(tǒng)疾病的常用藥物，糖皮質(zhì)激素通過與胞漿中的糖皮質(zhì)激素受體(GR)結(jié)合，繼之入核與糖皮質(zhì)激素受體反應(yīng)元件(GRE)結(jié)合調(diào)節(jié)一系列下游抗炎基因的表達(dá)?；蛘咄ㄟ^與AP-1，NF-k B相互作用抑制多種炎性細(xì)胞因子受體，酶，粘附分子的表達(dá)。激素受體主要包括兩種亞型，GRα和GR

2、β，GRα是激素發(fā)揮功能的受體亞型，目前大多數(shù)研究顯示GRβ是GRα的負(fù)性調(diào)控因子。 臨床上糖皮質(zhì)激素在哮喘，COPD的治療過程中會出現(xiàn)效果不明顯甚至激素抵抗的現(xiàn)象，當(dāng)無限增加GC劑量時仍不能取得預(yù)期的療效，反而增加了GC的副作用。關(guān)于激素抵抗產(chǎn)生的原因目前尚不明確。伴發(fā)有低氧的慢性炎癥性疾病如COPD，支氣管哮喘以及慢性炎癥性腸炎常常有激素作用低下的現(xiàn)象，而低氧是否是引起激素作用減弱的原因國內(nèi)尚未見報道，本實驗的研究目的即通過

3、觀察低氧下A549細(xì)胞GRα和GRβ的表達(dá)水平來進(jìn)一步探討低氧對激素作用的影響。 目的：研究不同低氧時間培養(yǎng)下，人肺腺癌上皮A549細(xì)胞糖皮質(zhì)激素受體α(GRα)和糖皮質(zhì)激素受體β(GRβ)的表達(dá)。探討低氧是否與糖皮質(zhì)激素抵抗的發(fā)生有關(guān)。 方法： 1.低氧小室和普通培養(yǎng)箱中分別對應(yīng)培養(yǎng)相同密度的肺腺癌上皮A549細(xì)胞24h，48h和72h。 2.分別于24h，48h和72h收取細(xì)胞，在倒置顯微鏡下運用SP

4、OT軟件拍攝照片以觀察24h，48h和72h低氧培養(yǎng)組與對照組比較細(xì)胞形態(tài)學(xué)以及細(xì)胞數(shù)目的改變。 3.用RT-PCR的方法來研究24h，48h和72h低氧培養(yǎng)組細(xì)胞與對照組比較GRα和GRβ mRNA表達(dá)的改變。 4.用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法來研究24h，48h和72h低氧培養(yǎng)組細(xì)胞與對照組比較GRα和GRβ蛋白表達(dá)的改變。 結(jié)果： 1.A549細(xì)胞低氧培養(yǎng)24h、48h、72h后細(xì)胞數(shù)目和形態(tài)學(xué)的改變。

5、 隨著低氧時間的延長，細(xì)胞生長速度48h和72h與24h比較生長速度逐漸減慢，視野內(nèi)細(xì)胞越來越少，48h低氧組細(xì)胞約減少至48h對照組細(xì)胞的50％，72h低氧組細(xì)胞約減少至72h對照組細(xì)胞的25％，且隨著低氧培養(yǎng)時間的延長，細(xì)胞腫脹變形逐漸加劇。 2.A549細(xì)胞低氧培養(yǎng)24h、48h、72h后GRα和GRβmRNA表達(dá)水平的改變24hGR α mRNA表達(dá)水平低氧組(0.914±0.079)與對照組(0.883±0.208

6、]比較略有降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)；48h、72hGR α mRNA表達(dá)水平低氧組(0.794±0.029、0.828±0.171)與對照組(1.054±0.120、1.187±0.173)比較顯著降低(p<0.05)；24h、48h、72hGR β mRNA表達(dá)水平低氧組(0.439±0.175、0.437±0.117、0.433±0.101)與對照組(0.429±0.140、0.443±0.114、0.553±0.1

7、10)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。 3.A549細(xì)胞低氧培養(yǎng)24h、48h、72h后GR α和GR β蛋白表達(dá)水平的改變。 24hGRα蛋白表達(dá)水平低氧組與對照組比較無顯著改變；48h和72hGRα蛋白表達(dá)水平低氧組與對照組比較顯著降低；24h、48h、72hGRβ的蛋白表達(dá)水平低氧組與對照組比較無顯著改變。 結(jié)論： A549細(xì)胞低氧培養(yǎng)48h、72hGR α的mRNA和蛋白表達(dá)水平與對照組比較