驚厥損傷對(duì)發(fā)育期大鼠大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)的影響.pdf

1、目的:研究圍生期驚厥損傷對(duì)發(fā)育中大鼠大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞糖皮質(zhì)激素受體( glucocorticoid receptor, GR)表達(dá)的影響。
　　 方法:將48只生后(postnatal，PN)7d的Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分成驚厥組和對(duì)照組，驚厥組每日吸入三氟乙醚誘導(dǎo)驚厥發(fā)作1次，每次持續(xù)30min，連續(xù)6d;對(duì)照組同樣操作但不吸入三氟乙醚。分別于生后(postnatal，PN)第13d、19d和2m每組各處死8只大

2、鼠，用免疫組織化學(xué)法觀察大鼠大腦皮層GR表達(dá)的變化。
　　 以原代培養(yǎng)的大鼠大腦皮層神經(jīng)元無鎂誘導(dǎo)的反復(fù)驚厥樣放電為模型，根據(jù)對(duì)體外原代培養(yǎng)6天皮層神經(jīng)元的不同處理分為正常細(xì)胞外液組和無鎂細(xì)胞外液組。神經(jīng)元在上述2種液體中孵育3小時(shí)，然后恢復(fù)正常DMEM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，在無鎂損害后1、7及12天時(shí)應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)及實(shí)時(shí)熒光定量PCR測定發(fā)育中大鼠皮層神經(jīng)元無鎂細(xì)胞外液處理后GR表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果:與對(duì)照組相比較

3、，在PN-13d時(shí)，驚厥組大鼠頂葉區(qū)GR免疫化學(xué)累計(jì)光密度(AOD)明顯低于正常對(duì)照組(P<0.05)，而在PN-19d和PN-2m時(shí)，驚厥組大鼠額葉、頂葉、顳葉區(qū)GR免疫化學(xué)AOD均明顯低于正常對(duì)照組(P<0.05)。體外培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元發(fā)現(xiàn)無鎂損傷后12d驚厥組GR蛋白免疫化學(xué)累積光密度較對(duì)照組顯著下降(P<0.O1)；而應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR發(fā)現(xiàn)，無鎂損傷后ld、7d驚厥組mRNA表達(dá)較對(duì)照組顯著增高(P<0.05)。