Stil基因在PC12細(xì)胞和斑馬魚視網(wǎng)膜細(xì)胞增殖中的作用及斑馬魚帕金森模型的建立.pdf

1、細(xì)胞增殖普遍存在于自然界，從低等的動(dòng)植物的細(xì)胞分裂到高級(jí)生物的生長(zhǎng)發(fā)育都離不開細(xì)胞增殖，而且細(xì)胞增殖在生物體的生長(zhǎng)發(fā)育過程中受到非常嚴(yán)謹(jǐn)而又精確的調(diào)控，一旦調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的某部分功能改變，則細(xì)胞增殖就會(huì)被打亂，進(jìn)而影響生物體的正常生長(zhǎng)發(fā)育或生理功能的實(shí)現(xiàn)。
　　組織與器官的再生離不開細(xì)胞增殖，組織器官的再生與修復(fù)都是要通過細(xì)胞不斷增殖分裂實(shí)現(xiàn)的。當(dāng)生物體的某部分組織或器官受到損傷后，就會(huì)啟動(dòng)相應(yīng)的信號(hào)通路來調(diào)控并實(shí)現(xiàn)組織和器官的修復(fù)。

2、在自然界眾多物種中，低等生物顯示出比高等生物更強(qiáng)的再生能力，比如水螅、渦蟲、甚至非洲爪蟾、魚類、蠑螈等，而作為高等生物的哺乳類則在漫長(zhǎng)的進(jìn)化中丟失了某些再生能力。本實(shí)驗(yàn)中采用的斑馬魚既具有很強(qiáng)的再生能力，而且其基因組還與人類基因組存在很高的同源性，非常具有研究意義。
　　Stil(SCL/TAL1 interrupting locus)基因，最早被發(fā)現(xiàn)于急性T細(xì)胞淋巴白血病人中，隨著研究的不斷深入，還發(fā)現(xiàn)當(dāng)該基因發(fā)生突變時(shí)，會(huì)導(dǎo)致

3、人的先天性小頭畸形癥，而且還通過與Shh信號(hào)通路起作用調(diào)控小鼠的左右對(duì)稱發(fā)育。隨后研究學(xué)者在很多癌癥細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)該基因上調(diào)表達(dá)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)Stil基因的表達(dá)產(chǎn)物是中心體的組成部分，在中心體的組裝和復(fù)制中起著重要作用，當(dāng)缺失Stil基因時(shí)，細(xì)胞中會(huì)缺失中心體;而當(dāng)過表達(dá)Stil基因時(shí)，細(xì)胞中則會(huì)出現(xiàn)2個(gè)甚至多個(gè)中心體。
　　本實(shí)驗(yàn)首先以PC12神經(jīng)細(xì)胞模型為研究對(duì)象，發(fā)現(xiàn)STIL蛋白在PC12細(xì)胞中的定位不僅存在細(xì)胞質(zhì)，還存在細(xì)胞

4、核內(nèi)，暗示著Stil基因可能還有別的未知功能;我們還證實(shí)了PC12細(xì)胞中的STIL也可以與SUFU和GLI1發(fā)生相互作用，而且還可能存在異源三聚體的蛋白復(fù)合體形式;當(dāng)沉默Stil基因時(shí)，細(xì)胞的增殖速度減慢，而且Shh信號(hào)通路的標(biāo)志基因gli1的表達(dá)也下調(diào)了;過表達(dá)Stil基因時(shí)，PC12細(xì)胞的增殖速度加快，gli1的表達(dá)也升高，其靶基因cyclinD2的表達(dá)也升高了，至此我們推測(cè)Stil基因可以通過調(diào)控gli1基因來間接調(diào)控cyclin

5、D2的表達(dá)，進(jìn)而影響周期蛋白依賴性激酶CDK的活性，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)控。
　　另外，我們通過在斑馬魚nbb+/-突變體(Stil基因突變)和野生型斑馬魚中研究I發(fā)現(xiàn)在對(duì)其視網(wǎng)膜注射6-羥多巴(6-OHDA)神經(jīng)毒素后，視網(wǎng)膜內(nèi)多巴胺細(xì)胞的增殖表現(xiàn)出不同的速率。當(dāng)Stil基因突變后，多巴胺細(xì)胞的增殖減慢，大約只有野生型的一半，而當(dāng)通過MO-sufu沉默sufu基因變相激活gli1基因時(shí)，多巴胺細(xì)胞的增殖相比野生型要強(qiáng)，而且在損