梅花鹿 IGFs基因的克隆與多態(tài)性分析.pdf

1、吉林省的梅花鹿飼養(yǎng)量歷來都位居全國之首，而我國飼養(yǎng)的梅花鹿主要以收茸為主，對于梅花鹿能否得到高產(chǎn)鹿茸一直倍受關(guān)注。吉林雙陽地區(qū)的梅花鹿是我國最早繁育出的梅花鹿茸用新品種，其特點是耐粗飼，產(chǎn)茸量高，深受廣大養(yǎng)戶的喜愛。所以在以上優(yōu)點的基礎(chǔ)上，決定再從分子水平上對雙陽梅花鹿鹿茸的生長繁育情況進行研究，尋找出對其直接或間接作用的功能基因，并對梅花鹿的品種進行改良，以達到獲得高產(chǎn)茸茸鹿的目的。
　　本試驗對胰島素樣生長因子 I（IGF-I

2、）及胰島素樣生長因子 II（IGF-II）兩個胰島素樣生長因子家族的多肽基因進行研究。①采用PCR-SSCP技術(shù)分析了胰島素樣生長因子 I基因(IGF-I)啟動子區(qū)及外顯子2在吉林雙陽梅花鹿群體中的遺傳多樣性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有5對引物存在多態(tài)性，對 IGF-I基因多態(tài)片段進行克隆、測序，確定多態(tài)位點的突變位置。進行數(shù)據(jù)分析，得到其基因型頻率、等位基因頻率并獲得優(yōu)勢基因型。對該基因上的微衛(wèi)星位點 PM進行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，對多態(tài)位點進行

3、克隆、測序及數(shù)據(jù)分析。②因 Genbank中沒有梅花鹿IGF-II基因序列的全長，所以為了更好的開展梅花鹿產(chǎn)茸性狀的研究，本試驗采用 RACE的方法對 IGF-II基因進行擴增，獲得了該基因的全長并在 Genbank中登錄。③根據(jù)已克隆到的IGF-II基因的3'UTR序列設(shè)計引物進行 PCR-SSCP，SSCP分析結(jié)果僅有一對引物出現(xiàn)多態(tài)性，對3'UTR基因多態(tài)片段進行克隆、測序，確定多態(tài)位點的突變位置。進行數(shù)據(jù)分析，得到其基因型頻率、

4、等位基因頻率以及優(yōu)勢基因型。
　　試驗結(jié)果表明①IGF-I基因啟動子區(qū)的數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示，引物 P1共檢測到四種基因型 AA、AB、BB、CC，其中 BB為優(yōu)勢基因型；引物P2檢測到三種基因型 AA、AB和 BB，其中 AA為優(yōu)勢基因型；引物 P3共檢測到三種基因型 AC、BB、BC，其中 BB為優(yōu)勢基因型；引物 P4檢測到兩種基因型 AA和 AB，其中 AA為優(yōu)勢基因型；引物 P8檢測到兩種基因型 AA和 AB，其中 AA為優(yōu)勢

5、基因型。對該基因上的微衛(wèi)星位點PM進行數(shù)據(jù)分析得到等位基因數(shù)及頻率 A：112(0.903)、B：129(0.097)及基因型頻率 AA：50(0.806)、AB：12(0.194)。②IGF-II基因的全長已登錄到 Genbank中，因為得到三條序列，將其全部提交到 Genbank上，登錄號分別為 IGF2V1：GU480023；IGF2V2：GU480024；IGF2V3：GU480025。③梅花鹿 IGF-II基因的3'UTR的數(shù)