東北梅花鹿鹿茸組織AnxA-1、AnxA-2基因cDNA克隆及表達(dá)分析.pdf

1、鹿茸角是雄性梅花鹿的第二性征，它是哺乳動(dòng)物中唯一可再生器官，在快速生長(zhǎng)期，其頂端增殖區(qū)的細(xì)胞分裂速度是腫瘤細(xì)胞分裂速度的近30倍，這樣的速度是其他哺乳動(dòng)物組織和器官所無(wú)法比擬的，鹿茸組織的細(xì)胞增殖、分化、凋亡受到特定基因的表達(dá)調(diào)控，但迄今仍無(wú)法從根本上闡明鹿茸生長(zhǎng)的生物學(xué)調(diào)控機(jī)制。
　　本試驗(yàn)以東北梅花鹿(Cervus nippon hortulorum)鹿茸尖端間充質(zhì)組織為材料，以對(duì)多種惡性腫瘤細(xì)胞起著重要調(diào)節(jié)作用的膜聯(lián)蛋白基因

2、為研究對(duì)象，用RT-PCR技術(shù)克隆出包含膜聯(lián)蛋白A1(Anxa-1)基因與膜聯(lián)蛋白A2(Anxa-2)基因全部編碼區(qū)的cDNA序列，并運(yùn)用生物信息學(xué)方法及實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)對(duì)這兩種基因的氨基酸序列及不同生長(zhǎng)時(shí)期的表達(dá)情況進(jìn)行了分析。主要研究結(jié)果如下：
　　1、東北梅花鹿鹿茸Anxa-1和Anxa-2基因cDNA克隆及生物信息學(xué)分析
　　Anxa-1與Anxa-2基因序列測(cè)序長(zhǎng)度分別為1059bp和1180bp，分別編碼346個(gè)

3、氨基酸和339個(gè)氨基酸。經(jīng)生物信息學(xué)分析，Anxa-1和Anxa-2基因編碼蛋白均為穩(wěn)定蛋白;相對(duì)分子質(zhì)量分別為38830.4和38612.0;理論等電點(diǎn)分別為6.17和6.92; Anxa-1蛋白一級(jí)結(jié)構(gòu)中亮氨酸占最大比例為10.4％，Anxa-2蛋白一級(jí)結(jié)構(gòu)中亮氨酸與賴氨酸占最大比例為10.0％; Anxa-1和Anxa-2蛋白均不具備信號(hào)肽，不屬于分泌蛋白;Anxa-1蛋白亞細(xì)胞定位于細(xì)胞質(zhì)，Anxa-2蛋白亞細(xì)胞定位于細(xì)胞核;通

4、過(guò)對(duì)Anxa-1和Anxa-2蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)這兩種蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)均由α-螺旋、無(wú)規(guī)則卷曲、擴(kuò)展鏈三部分組成，并成功構(gòu)建了這兩種蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)。分別對(duì)這兩種蛋白質(zhì)氨基酸序列進(jìn)行多重序列比對(duì)，發(fā)現(xiàn)這兩種基因在不同物種間保守性較高，推測(cè)其在不同物種間功能相似，通過(guò)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，發(fā)現(xiàn)這兩種基因在進(jìn)化中分為兩支，一支為哺乳動(dòng)物類，一支為鳥(niǎo)類，說(shuō)明這兩種基因均由共同祖先基因進(jìn)化而來(lái)，是重要的功能基因。
　　2、鹿茸不同生長(zhǎng)時(shí)期A