2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁
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文檔簡介

1、本試驗以興凱湖梅花鹿肝臟組織為研究材料,用Trizol方法提取興凱湖梅花鹿肝臟組織總RNA,反轉錄成單鏈cDNA,長距離PCR方法合成雙鏈cDNA;PCR產物經蛋白酶K水解、純化后,用SfiI酶切;將酶切產物進行分級分離,回收400bp以上的cDNA組分,并與λTriplEx2載體連接;連接產物經體外蛋白包裝,產生原始文庫;鑒定文庫的滴度和重組效率后,進行文庫擴增.隨機挑取96個噬菌斑,用載體克隆位點兩端的通用引物進行PCR擴增,以檢測

2、所構建的cDNA文庫的質量.經測定該文庫初始滴度為7.9×10m<'5>pfu/ml,擴增后滴度為1.06x10<'9>pfu/ml,重組率為88﹪.插入片段長度為0.3～3.0kb.同時,由于反轉錄過程中采用附加序列的方法使全長mRNA得到反轉錄,所以得到的cDNA是完整的,完全符合cDNA文庫的要求.本試驗成功構建了興凱湖梅花鹿肝臟組織的cDNA文庫. 興凱湖梅花鹿肝臟組織表達型九噬菌體cDNA文庫的成功構建,不僅保存了珍貴的梅花鹿

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