外周T細(xì)胞淋巴瘤中轉(zhuǎn)錄因子GATA3的預(yù)后分析和體外研究.pdf

1、背景和目的：
　　外周T細(xì)胞淋巴瘤(PTCL)是一組異質(zhì)性強(qiáng)、侵襲性高的非霍奇金淋巴瘤，缺乏規(guī)范統(tǒng)一的治療方案，預(yù)后較其他類型淋巴瘤差。尋找新的分子標(biāo)記物對于深入探索其成瘤機(jī)制、研發(fā)新藥都有重要意義。近幾年國外基于高通量基因組層面的研究首次揭示TH2細(xì)胞分化指標(biāo)轉(zhuǎn)錄因子GATA3可能在PTCL發(fā)生發(fā)展中起到作用。本研究擬進(jìn)行GATA3的預(yù)后研究，并在體外條件下探索GATA3對腫瘤增殖、浸潤等惡性行為的影響，為淋巴瘤發(fā)病機(jī)理研究提供

2、新的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
　　方法:
　　回顧性收集PTCL患者的福爾馬林固定石蠟包埋的病理標(biāo)本及臨床資料，所有病例均為2007年至2013年間由北京協(xié)和醫(yī)院病理科診斷的初治患者。對GATA3、TBX21、CD68進(jìn)行免疫組化染色，分析其表達(dá)與患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。在體外條件下通過慢病毒轉(zhuǎn)染法建立GATA3穩(wěn)定敲低的Hut78淋巴瘤細(xì)胞系，應(yīng)用流式細(xì)胞檢測技術(shù)研究敲低細(xì)胞系的凋亡變化，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測敲低細(xì)胞系的細(xì)胞因子

3、表達(dá)，通過條件培養(yǎng)方法研究敲低細(xì)胞系對M2巨噬細(xì)胞分化的影響。
　　結(jié)果:
　　本研究共納入109例初治PTCL患者，其中PTCL非特指為60例。在PTCL組織的腫瘤細(xì)胞中54例GATA3表達(dá)陽性(49.5％)，47例TBX21表達(dá)陽性(43.1％)，57例CD68表達(dá)陽性(52.3％)。GATA3和CD68與PTCL的不良預(yù)后相關(guān)。K-M曲線法發(fā)現(xiàn)，GATA3陽性組的中位總生存期(OS)為120天，GATA3陰性組的中位O

4、S為511天(Log-rank，P=0.000); CD68陽性組的中位OS為180天，CD68陰性組的中位OS為450天(Log-rank，P=0.037)。多因素分析提示ECOG評分≥2分、GATA3陽性為PTCL預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。相關(guān)性分析提示GATA3高表達(dá)與出現(xiàn)B癥狀（Pearson P=0.006）、CD68高表達(dá)相關(guān)（Pearson P＜0.01）。體外研究篩選出Hut78為GATA3高表達(dá)的T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系。應(yīng)用

5、慢病毒轉(zhuǎn)染shGATA3序列成功后，與對照組相比，Hut78-shGATA3細(xì)胞的GATA3mRNA和蛋白表達(dá)量均明顯下調(diào)，早期凋亡階段細(xì)胞百分比明顯增高。在細(xì)胞因子方面，Hut78-shGATA3轉(zhuǎn)錄IL-4、IL-5、IL-13及VEGF的mRNA水平均明顯下降。應(yīng)用淋巴瘤細(xì)胞上清誘導(dǎo)U937向巨噬細(xì)胞分化，研究發(fā)現(xiàn)與對照組相比，Hut78-shGATA3上清誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2分化的比例顯著下降。
　　結(jié)論:
　　在PT

6、CL中，GATA3陽性患者較GATA3陰性患者OS明顯縮短，且與ECOG評分≥2分一并為預(yù)后不良的獨(dú)立影響因素，提示GATA3可以作為PTCL患者評估預(yù)后的因素。GATA3表達(dá)量與CD68表達(dá)量呈正相關(guān)，提示GATA3可能促進(jìn)了巨噬細(xì)胞在PTCL腫瘤組織中浸潤。從絕對例數(shù)來看，GATA3高表達(dá)與嗜血綜合征的發(fā)生相關(guān)。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，T淋巴瘤細(xì)胞系Hut78的GATA3表達(dá)量顯著增高。GATA3敲低后，T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的早期凋亡比例增加，T