蝮亞科蛇毒中多種可作用于血液系統(tǒng)的蛋白質(zhì)研究.pdf

1、蛇毒中含有種類繁多、功能豐富的蛋白質(zhì)。這其中有相當(dāng)一部分可作用于高等動物血液系統(tǒng)，往往因其表現(xiàn)出的毒性而被視為血液毒素。這些作用于血液系統(tǒng)的蛋白質(zhì)不少有很高的酶活力或底物特異性，且對人類血液系統(tǒng)中的抑制劑普遍不敏感，作為檢驗試劑和臨床用藥具有一定的先天優(yōu)勢；蛇毒血液毒素中的各種蛋白酶與人類血液系統(tǒng)中的絲氨酸蛋白酶和人類基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)家族及ADAMs(proteins with isintegrinn

2、d etalloproteases)超家族的成員在結(jié)構(gòu)和功能上有很多相似之處，從而為研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系提供了便利，也為藥物設(shè)計和改進(jìn)提供了良好的素材。因此，蛇毒血液毒素可廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥和科研領(lǐng)域，具有相當(dāng)?shù)难芯績r值。 本論文中對蝮亞科蛇類蛇毒中多種可作用于血液系統(tǒng)的蛋白質(zhì)進(jìn)行了研究。其中包括：1)．從尖吻蝮蛇毒中分離純化出一種新型的凝血酶原激活劑AaPA，對其開展了生物活性及底物作用途徑研究、基因克隆表達(dá)和序列分

3、析。AaPA為單結(jié)構(gòu)域的金屬蛋白酶，分子量較小，僅24KD，并以自己獨(dú)特的方式激活凝血酶原，不同于以往所發(fā)現(xiàn)的四類蛇毒凝血酶原激活劑：它們分子量較大，包括多個結(jié)構(gòu)域。同時，根據(jù)AaPA基因序列，其表面結(jié)合有一個鈣離子，EDTA對AaPA溶液構(gòu)象的影響過程表明AaPA對此鈣離子結(jié)合較為牢固，我們推斷此鈣離子除了幫助穩(wěn)定金屬蛋白酶結(jié)構(gòu)之外，在AaPA識別凝血酶原的過程中很可能也起重要作用。此外，鑒于血漿絲氨酸蛋白酶原激活位點的序列特性，以及

4、哺乳動物中MMPs、ADAMs與AaPA的結(jié)構(gòu)相似性和功能相關(guān)性，我們提出假說，認(rèn)為哺乳動物MMPs、ADAMs兩個家族中可能有某些成員可激活一些與凝血有關(guān)的絲氨酸蛋白酶原，在一些生化事件中發(fā)揮作用。2)．從蛇島蝮蛇中分離純化得到一種類去整合素／富半胱氨酸區(qū)雙結(jié)構(gòu)域蛋白Asdislicrin，對其進(jìn)行了生物活性研究、基因克隆和序列分析，并在大腸桿菌成功表達(dá)，得到了具有活性的重組蛋白。Asdisl icrin能抑制由膠原誘導(dǎo)的血小板聚集，

5、呈劑量依賴性；并能抑制血管形成，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。因此具有作為抗血栓及抗腫瘤藥物的潛質(zhì)。擴(kuò)增Asdislicrin的基因時，還獲取了一種來自同一蛇種中的去整合素(disintegrin)的基因，通過數(shù)據(jù)庫檢索，在世界上首次發(fā)現(xiàn)：在許多蛇類中P-II型蛇毒金屬蛋白酶的3’非編碼區(qū)和同蛇種的P—III型金屬蛋白酶3’編碼區(qū)末端高度同源。此發(fā)現(xiàn)可能有助于了解蛇毒金屬蛋白酶和哺乳動物ADAMs轉(zhuǎn)錄后加工和翻譯后加工的機(jī)制，也可能有助于確立富