梔子甙的提取純化工藝及β-葡萄糖苷酶發(fā)酵條件的優(yōu)化.pdf

1、本研究是梔子系列產(chǎn)品深加工的一部分，在相繼成功開(kāi)發(fā)出梔子藍(lán)、梔子紅色素以后，對(duì)梔子系列產(chǎn)品進(jìn)行的更深入一步的研究。 以梔子黃生產(chǎn)的廢液為原料，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂來(lái)富集、提取純化梔子甙產(chǎn)品。研究結(jié)果表明：HPD100型大孔吸附樹(shù)脂能夠有效地吸附梔子黃廢液中的梔子甙，20％的乙醇溶液能夠?qū)d子甙完全洗脫下來(lái)，732陽(yáng)離子交換樹(shù)脂和D301陰離子交換樹(shù)脂的連用，可以除去洗脫液中絕大部分的雜質(zhì)和色素。通過(guò)對(duì)活性碳的脫色條件進(jìn)行優(yōu)化，能夠得

2、到無(wú)色透明的梔子甙水溶液，最佳的脫色條件為：活性炭用量4％，溫度50℃，時(shí)間50min。將活性炭脫色液經(jīng)冷凍干燥以后，可以得到白色疏松狀的梔子甙固體，經(jīng)檢測(cè)其純度可以達(dá)到84.43％。該固體經(jīng)過(guò)重結(jié)晶以后，可以得到高純度的梔子甙產(chǎn)品，其純度達(dá)99.70％。 通過(guò)對(duì)小鼠進(jìn)行藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)，分別考察了梔子甙的消炎、鎮(zhèn)痛作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：梔子甙能夠延長(zhǎng)熱刺激所致小鼠痛覺(jué)反應(yīng)時(shí)間，同時(shí)能夠顯著抑制醋酸引起的小鼠的扭體次數(shù)，具有一定的鎮(zhèn)痛作

3、用。此外，梔子甙對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹具有明顯的抑制作用，能夠降低由醋酸引起的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的增加，對(duì)急性炎癥滲出有明顯的抑制作用，從而證明了其消炎作用。 最后，將初步提純的梔子甙產(chǎn)品應(yīng)用于梔子藍(lán)色素的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，同時(shí)對(duì)本實(shí)驗(yàn)室篩選到的細(xì)菌HGS-3的產(chǎn)酶條件進(jìn)行了優(yōu)化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，梔子甙對(duì)菌株HGS-3的產(chǎn)酶有著強(qiáng)烈的誘導(dǎo)效果，最佳的產(chǎn)酶條件為：碳源(甘蔗渣∶麩皮=3∶1)5％，牛肉膏0.5％，梔子甙0.2％，KH2PO

4、4 0.4％，MnSO4 0.04％，pH9.0，裝液量20ml，轉(zhuǎn)速200r/min，45℃發(fā)酵24h。通過(guò)優(yōu)化以后，發(fā)酵液中的酶活可達(dá)到93.48U/ml比優(yōu)化以前的酶活16.55U/ml將近提高了6倍。 經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，將初步提純的梔子甙作為細(xì)菌HGS-3發(fā)酵的原料，比直接用梔子黃廢液為原料來(lái)發(fā)酵梔子藍(lán)色素，有著較大的優(yōu)越性。該工藝明顯縮短了發(fā)酵周期，產(chǎn)生的梔子藍(lán)色素的色價(jià)高，色調(diào)好，峰型單一，其最大吸收峰位于600nm處，