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1、β-葡萄糖苷酶(β-Glucosidase, EC3.2.1.21)屬于纖維素酶類,作為纖維素酶的一個(gè)重要組成部分,在醫(yī)療、食品、生物質(zhì)轉(zhuǎn)化中有重要的應(yīng)用價(jià)值。本課題利用實(shí)驗(yàn)室保藏的一株β-葡萄糖苷酶產(chǎn)生菌(AspergillusoryzaeHML0366),對(duì)菌種選育、發(fā)酵條件優(yōu)化和酶法轉(zhuǎn)化合成龍膽低聚糖進(jìn)行了深入地研究,方案和結(jié)果如下:
1.利用紫外-60Co誘變處理對(duì)米曲霉HML0366(Aspergillusory
2、zaeHML0366)菌株進(jìn)行復(fù)合誘變,然后通過(guò)篩選抗葡萄糖阻遏突變株,得到一株正突變菌株ASPE0485,β-葡萄糖苷酶酶活提高到17.65U/mL,是出發(fā)菌株的2.78倍。
2.采用單因素、Plackett-Burman顯著因子實(shí)驗(yàn)和Box-Behnken響應(yīng)面分析優(yōu)化了β-葡萄糖苷酶產(chǎn)生菌的發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件,確定搖瓶發(fā)酵的最佳培養(yǎng)基組成為(%,w/v):玉米芯3.8%、大豆蛋白胨0.5%、KH2PO40.5%、M
3、gSO4·7H2O0.05%、CaCl20.05%、吐溫-800.27%和接種量5.3%;最佳培養(yǎng)條件為:初始pH自然、種齡12h、裝量50mL/250mL、搖床轉(zhuǎn)速160r/min,培養(yǎng)溫度32℃、培養(yǎng)時(shí)間5d;在此條件下發(fā)酵,得到酶活為25.32U/mL比原始酶活17.65U/mL提高了43.5%。
3.利用所獲得的β-葡萄糖苷酶粗酶液與高濃度的葡萄糖進(jìn)行轉(zhuǎn)苷反應(yīng)實(shí)驗(yàn),并通過(guò)TLC和HPLC的鑒定方法對(duì)酶轉(zhuǎn)苷活性及產(chǎn)物
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