甲狀腺素對(duì)成年期甲狀腺功能減退大鼠前額葉SNARE和syt-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：以成年雄性Sprague-Dawley大鼠腹腔注射丙基硫氧嘧啶(6-n-propyl-2-thiouracil,PTU)1mg/100g體重建立成年期甲狀腺功能減退癥(簡(jiǎn)稱(chēng)甲減)動(dòng)物模型,研究成年期甲減大鼠前額葉可溶性N-乙基馬來(lái)酰胺敏感因子附著蛋白受體(soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor,SNARE)和突觸結(jié)合蛋白-1(syn

2、aptotagmin-1,syt-1)的表達(dá)情況及甲狀腺素替代治療后的恢復(fù)狀況,探討甲減腦損傷及恢復(fù)的分子機(jī)制。
　　方法：健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠45只,體重250～300g,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,將大鼠隨機(jī)分為4組:(1)甲減組大鼠每日腹腔注射PTU1mg/100g體重(BW)共六周(n=12);(2)小劑量甲狀腺激素替代治療組(T4-5組,n=11)。大鼠每日腹腔注射PTU1mg/100g BW,四周后每日給

3、予左旋甲狀腺素(Levothyroxine,L-T4)5μg/100g BW兩周;(3)大劑量甲狀腺激素替代治療組(T4-20組,n=11)。大鼠每日腹腔注射PTU1mg/100g BW,四周后每日給予L-T420μg/100g BW兩周;(4)正常對(duì)照組大鼠每日腹腔注射同體積生理鹽水六周(n=11)。造模結(jié)束后,采血取腦,應(yīng)用放射免疫法檢測(cè)大鼠血清T3、T4水平,超敏S-P法行免疫組織化學(xué)檢測(cè),光學(xué)顯微鏡拍攝前額葉分子層(Ⅰ),外顆粒

4、層(Ⅱ),外椎體層(Ⅲ),內(nèi)顆粒層(Ⅳ)和內(nèi)椎體層(Ⅴ)照片,應(yīng)用生物圖像分析系統(tǒng)對(duì)前額葉五層SNARE和syt-1免疫反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行光密度值分析,以平均光密度(average optical density,AOD)值作為觀(guān)察指標(biāo)。所有數(shù)據(jù)以x±s表示,運(yùn)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(one way ANOVA),進(jìn)一步Post hoc分析采用LSD法進(jìn)行多重比較。Ps＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：1.體重

5、變化：造模前各組大鼠體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F(3,42)=0.21,P=0.93)。造模結(jié)束后,正常對(duì)照組大鼠體重增加49.0％,而甲減組、T4-5組、T4-20組分別增加21.5%、32.5%和26.1%(與正常對(duì)照組比較,Ps＜0.05)。2.血清T3、T4水平：與正常對(duì)照組相比,甲減組大鼠血清T3、T4水平顯著降低,分別為對(duì)照組的53.6%、77.5%(Ps＜0.02);小劑量替代治療組大鼠血清T3、T4恢復(fù)至正常對(duì)照組水平;大劑量替

6、代治療組大鼠血清T3、T4顯著高于小劑量替代治療組和正常對(duì)照組(Ps＜0.001)。3.SNAP-25、syntaxin-1、VAMP-2、syt-1蛋白在各組大鼠前額葉各層內(nèi)表達(dá)量的變化。免疫組化檢測(cè)顯示:SNAP-25、syntaxin-1、VAMP-2、syt-1的免疫反應(yīng)產(chǎn)物在四組大鼠前額葉Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ和Ⅴ層內(nèi)的分布相似,陽(yáng)性顆粒(棕黃色)在各區(qū)的每一層均有分布,但密度不同。量化分析結(jié)果顯示:甲減組大鼠前額葉Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ和Ⅴ

7、層內(nèi)SNAP-25蛋白表達(dá)水平較正常對(duì)照組顯著增多(Ps＜0.001);予大、小劑量甲狀腺激素替代治療后,SNAP-25的蛋白表達(dá)水平在前額葉五層內(nèi)與正常對(duì)照組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,與甲減組比較,小劑量替代治療組大鼠額葉五層無(wú)明顯不同(Ps＞0.05),大劑量替代治療組大鼠前額葉各層內(nèi)SNAP-25表達(dá)水平均顯著降低(Ps＜0.05)。甲減組syntaxin-1和syt-1蛋白表達(dá)水平較正常對(duì)照組顯著減少(Ps＜0.001);大、小劑量甲

8、狀腺激素替代治療后,syntaxin-1和syt-1蛋白表達(dá)水平與正常對(duì)照組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,與甲減組比較,小劑量替代治療組大鼠額葉Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ和Ⅴ四層的syntaxin-1蛋白表達(dá)顯著增加,syt-1蛋白在小劑量替代治療時(shí)前額葉Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ及Ⅴ層表達(dá)增加明顯(Ps＜0.05),但大劑量替代治療后兩種蛋白在前額葉五層的表達(dá)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的增加(Ps＜0.05)。VAMP-2的蛋白表達(dá)水平在前額葉各組間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異。
　　結(jié)論