石蒜與忽地笑熒光原位雜交研究.pdf

1、石蒜屬植物是一類優(yōu)良的觀賞和藥用植物，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。同時(shí)，石蒜屬植物的染色體核型變異大，且易于觀察，也是細(xì)胞生物學(xué)和系統(tǒng)發(fā)育等領(lǐng)域研究的好材料。目前尚未有石蒜屬熒光原位雜交的研究報(bào)道。本研究選擇產(chǎn)自江蘇和安徽省的石蒜與忽地笑，在核型分析的基礎(chǔ)上，采用染色體熒光原位雜交技術(shù)，將5SrDNA與45SrDNA進(jìn)行染色體定位，并從長(zhǎng)筒石蒜中克隆5SrDNA與18SrDNA基因片段，研究成果如下： 1、通過改進(jìn)染色體制片技術(shù)、摸索探

2、針標(biāo)記方式與原位雜交流程，在石蒜屬中建立起了熒光原位雜交技術(shù)，為FISH技術(shù)在石蒜屬中的廣泛開展奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。 2、石蒜與忽地笑核型為2n=33=15t+18st，2n=16=6m+10t，分屬4A與3B核型。符合羅伯遜易位進(jìn)化規(guī)律。推測(cè)忽地笑Ⅰ染色體為近端著絲粒染色體，存在短臂。 3、45SrDNA定位的結(jié)果顯示：石蒜染色體上發(fā)現(xiàn)6個(gè)雜交位點(diǎn)，在3號(hào)與5號(hào)染色體的近著絲粒區(qū)域亦即短臂端部各有3個(gè)位點(diǎn)；忽地笑染色體上發(fā)

3、現(xiàn)11個(gè)雜交位點(diǎn)，其中10個(gè)雜交位點(diǎn)分別位于所有10條Ⅰ染色體近著絲粒區(qū)域亦即短臂端部，1個(gè)位點(diǎn)位于3號(hào)染色體中1條同源染色體的近著絲粒區(qū)域，證實(shí)了忽地笑Ⅰ染色體存在短臂的推測(cè)。45SrDNA雜交位點(diǎn)數(shù)目忽地笑比石蒜多近一倍，表明兩者親緣關(guān)系較遠(yuǎn)；初步推斷忽地笑在系統(tǒng)進(jìn)化中處于較高的地位，染色體融合可能是主要的染色體進(jìn)化方式。 4、5SrDNA定位的結(jié)果顯示：在忽地笑Ⅴ染色體的著絲粒區(qū)域、Ⅰ染色體的著絲粒區(qū)域、近端部區(qū)域都出現(xiàn)了

4、明亮的雜交信號(hào)。在石蒜染色體上發(fā)現(xiàn)9個(gè)雜交位點(diǎn)，在1號(hào)長(zhǎng)臂端部、5號(hào)近端部區(qū)域和6號(hào)長(zhǎng)臂近著絲粒區(qū)域各有3個(gè)位點(diǎn)。在1號(hào)和6號(hào)染色體上，信號(hào)位點(diǎn)與數(shù)量在各自的3條同源染色體間沒有明顯區(qū)別。5號(hào)染色體的3條染色體間的信號(hào)有明顯區(qū)別，其中的2條染色體上各有1個(gè)信號(hào)，而在另一條染色體上有2個(gè)信號(hào)，但強(qiáng)度較弱，推測(cè)這3條同源染色體可能起源不同，或者在進(jìn)化過程中發(fā)生過染色體結(jié)構(gòu)變異。 5、通過PCR反應(yīng)，從長(zhǎng)筒石蒜基因組DNA上擴(kuò)增出了1