家蠶vasa基因的原位雜交研究.pdf

1、西南大學(xué)碩士學(xué)位論文家蠶vasa基因的原位雜交研究姓名：關(guān)國平申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：魯成;潘敏慧20060501I n s i t uH y b r i d i z a t i o n o nV a s aG e n e o fS i l k w o r m , B o m b y x m o r i ．C a n d i d a t e G u a n G u o p i n gA d v i s o r P r

2、 o f ．L uC h e n gA s s o c i a t e P r o f ．P a n M i n h u iA B S T R A C TF r o z e ns e c t i o n st os i l k w o r m ( B o m b y xm o r O e g g so fd i f f e r e n td e v e l o p m e n t a ls t a g e sh a v eb e e n

3、p r o c u r e d ．I na d d i t i o n ，al o to fp i c t u r e sh a v eb e e no b t a i n e db y a s e r i e so ff r o z e ns e c t i o n so fd i f f e r e n ts t a g e s T h e s ep i c t u r e ss h o wr e s p e c t i v e c

4、 h a r a c t e r i s t i co ft h e s es t a g e s ．O nt h eo n eh a n d ，t h er e s u l t sc o n f o r ma n dc o m p l e m e n tt h ea n c e s 訂a lt h e o r i e so n t h i ss t u d y , o nt h eo t h e rh a n d ，i ti s b

5、e l i e v e dt h a tt h e s t u d i e sp r o v i d ea v a l u a b l e b a s i so n f u r ' t h e r m o l e c u l a rb i o l o g y r e s e a r c ho fs i l k w o r m ( B o m b y xm o r O ，e ．g ．w eh a v e t o b ea c q

6、u a i n t e d w i t ht h e n o r m a lm o r p h o l o g y b e f o r et h es t u d y 0 1 2g e n ef u n c t i o n ．S o m e c o n t i n u o u sf r o z e ns e c t i o n so f 3 5 ha n d4 8 he m b r y o sh a v eb e e np r o c

7、u r e d ．T h er e s u l t st e l lU St h a t t h e e m b r y o sk e e pt h ec u b i cs h a p et i l lt h ef o r m a t i o no f t h ew h o l e c u t i c l e ．L a t e r , t h es h a p ea r ea l m o s tk e e p i n gc y l i

8、n d e r 枷1h a t c h ．M a n yf a c t o r ss u c ha s s t a g e s ，m e t h o d s ，p e r s o n a ld e v e l o p m e n t a ld i f f e r e n c ea n dt h ep r o t o c o lc o u l di m p a c tt h ea n a l y s i so f t h er e s u

9、 l t s ．T h e r e f o r e ，i ti sb e t t e rt oc o n s u l ta sm a n y a sp o s s i b l er e f e r e n c e sw h e n w e r e s e a r c hi n t ot h e e m b r y o n i cd e v e l o p m e n t o f s i l k w o r m s ．V a s a i

10、s o n eo f t h e f a t e f u l e l e m e n t s o f g e r ml i n e ，w h i c h i sc o n s e r v e d w i d e l yi nm a n ys p e c i e s ．S i n c e i t h a sb e e nf i r s tr e p o s e di n D r o s o p h i l a ，v a $ l lh o

11、m o l o g u e sh a v eb e e ni d e n t i f i e di nm a n y o t h e ri n s e c t s ，n e m o t o d e ( C e l e g a n s ) ，f r o g ( X e n o p u sl a e v i s ) ，p r i m a r ye u k a r y o t i co r g a n i s m ，p l a n t sa

12、n dm a m m a l i a n i ns u c c e s s i o n I no u rr e s e a r c h ，as i l k w o r mP a s ae D N A h a s b e e n c l o n e d ，w h i c hi Su s e da st h e p r o b et oh y b r i d i z ei ns i l k w o r me m b r y o sa n d

13、g o n o d sa f t e rl a b e l l e d w i t hD I G I t s h o w s t h a ts i l k w o r mv a s a e x p r e s s e sa t t h es i t e sw h e r e t h e g e r m l i n ec e l le x i s t sa n dt h ef u t u r eg o n o d s w i l lo c

14、 c u r ．O n t h eb a s i s ，s i l k w o r mv a s ag e n eh a sb e e ns t u d i e db y i n s i t uh y b r i d i z a t i o n ( I S H ) o ng o n a d s T h eI S Hr e s u l t ss h o w t h a ts i l k w o r m v a s ae x p r e s

15、 s e s o n l yi ng e r m c e l ll i n e s ( e ．g ．o o c y t e ，s p e r m a t o c y t e ) ，i m p l y i n gt h e i m p o r t a n t r o l es i l k w o r m p a s ap l a y si n t h ee a r l y d e v e l o p m e n to f e m b r

16、y o s a n d t h ed i f f e r e t i a t i o no f g e r m l i n eI nc o n c l u s i o n ．s i l k w o r mV ∞4p l a y sa l li m p o r t a n tr o l e i n t h ed e t e r m i n a t i o no f t h eg e r m l i n e ．W h a t ’S m o

17、r e ，t h eo p t i m i z a t i o n o f l S H h a sb e e n t e s t e d T h e f i n d i n g ss h o w t h a t m a n y f a c t o r si m p a c to nt h ee x p e r i m e n tr e s u l t s s u c ha sm a t e r i a l s ，f i x a t i

18、o n , d i g e s t i o no f e n z y m e s ，t e m p e r a t u r eo fh y b r i d i z a t i o na n d w a s h i n g ．a(chǎn) sw e l la sd y em e t h o d s ．T os u m u p ，t h ee s t a b l i s h m e n to f t h eI S H p r o t o c o li