棗基因組原位雜交技術(shù)體系建立及贊皇大棗起源的研究.pdf

1、在棗和酸棗中‘贊皇大棗’是自然三倍體棗品種，表現(xiàn)出多倍體所具有的抗逆性強(qiáng)、果實(shí)大、味甜、豐產(chǎn)、營養(yǎng)豐富等優(yōu)點(diǎn)。目前，有關(guān)三倍體贊皇大棗的起源途徑還知之甚少，多倍體育種是棗育種的一個(gè)方向，基因組原位雜交技術(shù)(GISH)和45 S、5S rDNA在染色體上的比較定位技術(shù)可以有效地進(jìn)行基因組同源性比較和多倍體起源的探討。本試驗(yàn)通過借鑒其他作物上的GISH體系，建立棗、酸棗基因組原位雜交技術(shù)體系，探討三倍體贊皇大棗起源，旨在為棗的細(xì)胞學(xué)研究、多

2、倍體品種的選育以及染色體識(shí)別等方面提供依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
　　1、通過去壁低滲法染色體制片，探針標(biāo)記的制備、染色體DAPI濃度優(yōu)化，建立了棗基因組原位雜交(Genomic in situ hybridization，GISH)技術(shù)體系，并用該技術(shù)檢測了棗和酸棗基因組之間的同源性。用阜平大棗做探針給酸棗雜交，用酸棗做探針給阜平大棗雜交，以及分別用阜平大棗、酸棗做探針給贊皇大棗雜交，所有染色體都顯示出較強(qiáng)的雜交信號(hào)并均勻布滿其全

3、長。結(jié)果表明:棗和酸棗基因組之間具有高度同源性，為證實(shí)棗起源于酸棗，兩者同屬一個(gè)種提供了分子細(xì)胞遺傳學(xué)的證據(jù)，研究也表明贊皇大棗為同源三倍體。
　　2、5S rDNA和45S rDNA在棗和酸棗中期染色體上比較定位
　　(1)利用染色體熒光原位雜交技術(shù)(FISH)對(duì)5S rDNA在3個(gè)棗品種和酸棗類型的中期染色體上的分布情況進(jìn)行了分析。結(jié)果表明:阜平大棗、酸棗和贊皇大棗分別有6、4、4個(gè)雜交位點(diǎn);阜平大棗5S rDNA雜交位

4、點(diǎn)主要分布在1、2、6、7號(hào)染色體上，酸棗5S rDNA雜交位點(diǎn)主要分布在1、3號(hào)染色體上，贊皇大棗5S rDNA雜交位點(diǎn)主要分布在2、6號(hào)染色體上，雜交位點(diǎn)的數(shù)目和信號(hào)的分布情況表現(xiàn)出一定的差異性，在染色體上的分布位置不固定，45S rDNA和5S rDNA有分布在同一條染色體上的現(xiàn)象。
　　(2)45S rDNA在5個(gè)棗品種和酸棗類型的中期染色體進(jìn)行比較定位:阜平大棗、酸棗、鈴鈴棗、贊皇大棗和蘋果棗分別有4、4、2、5、5個(gè)雜

5、交位點(diǎn);阜平大棗45SrDNA雜交位點(diǎn)主要分布在1、3、12號(hào)染色體上，酸棗45S rDNA雜交位點(diǎn)主要分布在2、3號(hào)染色體上，鈴鈴棗45S rDNA雜交位點(diǎn)主要分布在2號(hào)染色體上，贊皇大棗45S rDNA雜交位點(diǎn)主要分布在1、3、5、12號(hào)染色體上，蘋果棗45S rDNA雜交位點(diǎn)主要分布在3、5、6、12號(hào)染色體上，雜交位點(diǎn)的數(shù)目和信號(hào)的分布情況表現(xiàn)出一定的差異性，主要分布在:短臂近著絲粒區(qū)域、長臂近著絲粒區(qū)域、著絲粒區(qū)域、短臂末端、

6、長臂末端。從雜交結(jié)果說明贊皇大棗雜交位點(diǎn)正好含有阜平大棗的雜交位點(diǎn)，從而進(jìn)一步說明贊皇大棗的起源可能與阜平大棗有關(guān)。
　　3、以阜平大棗和玲玲棗做為封阻DNA，分別以鈴鈴棗、酸棗和阜平大棗做探針DNA，給贊皇大棗雜交。結(jié)果表明:阜平大棗作封阻DNA，鈴鈴棗和酸棗作探針DNA給贊皇大棗雜交，贊皇大棗36條染色體中24條染色體完全被封阻住沒有雜交信號(hào)，而12條染色體有雜交信號(hào);以玲玲棗作封阻DNA與贊皇大棗雜交的情況與阜平大棗作封阻情