毛豹皮樟基因組總DNA的提取及RAPD技術體系的建立.pdf

1、該試驗以毛豹皮樟的葉片為材料,通過對不同的DNA提取方法進行試驗,尋找最佳的毛豹皮樟DNA提取方法;優(yōu)化擴增程序和反應條件,建立起毛豹皮樟的RAPD技術體系;并將該技術體系應用于80個毛豹皮樟葉片的RAPD擴增中.結果表明:一、使用改良SDS提取法有效地解決了毛豹皮樟基因組總DNA提取中的褐變問題,同時所提取的DNA均呈白色絮狀,A<,260>/A<,280>值都在1.8以上,從檢測所得產率和純度可知該DNA模板完全可以用于RAPD分析

2、;另外,該方法還具有成本低、操作簡單、省時等特點.二、用CTAB法提取毛豹皮樟葉片的DNA時,所得DNA量很少,而且模板中含色素、蛋白質等雜質很多,在后期進行RAPD擴增時,雜質的影響導致擴增不穩(wěn)定或者擴增失敗,表明CTAB提取法對于含酚類等次生物質較多的物種并不適用.三、擴增程序采用:預變性溫度為94℃1min,變性溫度為94℃1min,復性溫度為34℃1min,72℃延伸2min,共45個循環(huán),最后72℃延伸10min,同時反應體系

3、(20μl反應體系)采用:dNTPs0.4μl(內含1Nm/μl),10×PCR2μl,MgCl<,2>μl,Taq酶0.3μl(0.5u/μl),H<,2>O11.3μl,DNA模板2μl(40ng),Primer 2μl(0.8Pm/μl),能夠得到清晰穩(wěn)定的擴增帶譜.四、將所建立的RAPD技術體系應用于20個毛豹皮樟葉片DNA的RAPD擴增中,篩選出16個引物,所得的譜帶清晰,多態(tài)性高達46.8﹪,反映了各試材之間在DNA序列上存