細(xì)菌基因組dna提取試劑盒離心柱型

1、1細(xì)菌基因組細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒（離心柱型）提取試劑盒（離心柱型）GK400310GK400320GK400350GK4003100一.試劑盒組成試劑盒組成ComponentsGK40031010PrepsGK40032020PrepsGK40035050PrepsGK4003100100PrepsGenCleanColumn2.0mlCollectionTubeLysisSolutionAW1Solution(a)AW2Solu

2、tion(b)AEBuffer(c)TE(pH8.0)BoiledRNaseAProteinaseK(d)Lysozyme(f)SPBufferprotocol10104ml6ml3ml3ml2ml50l30l5mg1.0ml1202010ml12ml8ml8ml4ml240l250l15mg1.0ml1505025ml30ml20ml20ml10ml480l500l30mg1.0ml110010050ml60ml40ml40ml20m

3、l120l1000l60mg1.0ml1(a)首次使用前，必須在AW1溶液瓶中按表示量加入無(wú)水乙醇，充分混勻后使用。每次使用后將瓶蓋蓋緊，以保持中的AW1乙醇含量。如果您發(fā)現(xiàn)AW1由于運(yùn)輸或保管不當(dāng)造成容量嚴(yán)重不準(zhǔn)，請(qǐng)用量筒定容后再加入0.6倍體積的無(wú)水乙醇。(b)首次使用前，必須在AW2瓶中加入4倍體積的無(wú)水乙醇，充分混勻后使用。每次使用后將瓶蓋蓋緊，以保持AW2中的乙醇含量。如果您發(fā)現(xiàn)AW2由于運(yùn)輸或保管不當(dāng)造成容量嚴(yán)重不準(zhǔn)，請(qǐng)用量

4、筒定容后再加入4倍體積的無(wú)水乙醇。(d)AEBuffer為10mMTrisHCl0.5mMEDTApH8.5。TE(pH8.0)或者水（pH7.0）均可以使用，但是DNA的洗脫效率通常要低20%左右。(e)收到后分裝20℃凍存。不得將ProteinaseK直接加到LysisSolution中，以免酶失活。(f)Lysozyme使用前加入按5mg溶于100l計(jì)算，溶于SPBuffer，溶解后，分裝于20℃凍存?？蛻糇詡洌篜BS緩沖液，胰蛋

5、白酶，無(wú)水乙醇運(yùn)輸運(yùn)輸儲(chǔ)存溫度儲(chǔ)存溫度運(yùn)輸室溫儲(chǔ)存ProteinaseKLysozymeBoiledRNaseA:20℃其他室溫二主要用途二主要用途從細(xì)菌和各種培養(yǎng)細(xì)胞中小規(guī)模抽提基因組DNA。三主要特點(diǎn)三主要特點(diǎn)1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，重復(fù)性好。2.不需要使用有毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。3.快速，簡(jiǎn)捷，單個(gè)樣品操作一般可在50分鐘內(nèi)完成。4.多次柱漂洗確保提取細(xì)菌基因組的

6、高純度，OD260280nm典型的比值達(dá)1.7～1.9，長(zhǎng)度可達(dá)50～100kb，可直接用于PCR，Southernblot和各種酶切反應(yīng)。3七七問答問答Q1基因組基因組DNA得率低或無(wú)基因組得率低或無(wú)基因組DNAA1一般情況下，從100l1ml過夜培養(yǎng)的大腸桿菌中，可以提取110g的基因組DNA，推薦的菌液量是用500l的過夜培養(yǎng)的濃菌液。我們不建議用過多的菌液，可能導(dǎo)致溶液不足而降低所提DNA的質(zhì)量?；蚪MDNA得率較低時(shí)可從一下幾

7、個(gè)方面考慮：1.DNA未充分釋放，保證在TE中充分懸浮菌體，注意不要?dú)埩艟w，加入DigestionSolution充分混勻。2.溶菌酶失活，溶菌酶要用附帶的SPbuffer配制，用水或堿性的TE配置的溶菌酶不能長(zhǎng)期保存。配制好的溶菌酶最好分裝成小份于20℃保存。3.ProteinaseK失活，proteinaseK起到酶解細(xì)菌的作用，該酶失活后細(xì)菌裂解效率將大大降低。4.洗脫時(shí)將滅菌水或ElutionBuffer加熱至65℃后使用將有

8、利于提高洗脫效率。5.嚴(yán)格按照操作方法進(jìn)行操作有利于提高基因組DNA得率。Q2提取的基因組提取的基因組DNA有降解，為什么？有降解，為什么？A21.確認(rèn)選用的培養(yǎng)菌體是否新鮮，如果菌體需要保存時(shí)，請(qǐng)于80℃保存2.起始菌液量過多，導(dǎo)致菌液裂解不充分，部分DNA降解。3.菌體本身富含DNA酶活性，加入Digestionsolution后再補(bǔ)加20ul0.5MEDTA溶液來(lái)抑制內(nèi)源性核酸酶。Q3提取的提取的DNA中有中有RNA污染，為什么？

9、污染，為什么？A31.一般提取基因組DNA過程中，RNA殘留已經(jīng)很少了，如果需要減少提取DNA中的RNA的含量，有必要在消化步驟中加入4lRNaseA。2.RNaseA可能失活。RNaseA一般比較穩(wěn)定，不易失活。如果確認(rèn)是RNaseA長(zhǎng)期保存等原因?qū)е缕浠钚詥适?，可以用?shí)驗(yàn)室中已有的RNaseA替代試劑盒中的RNaseA。Q4提取的基因組提取的基因組DNA生物活性差，為什么？生物活性差，為什么？A41.提取的基因組DNA中鹽分濃度過高

10、，請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作。2.提取的基因組DNA中含有乙醇。離心的速度和時(shí)間應(yīng)該嚴(yán)格遵循說(shuō)明書要求進(jìn)行。Q5能否用本試劑盒提取酵母中的基因組能否用本試劑盒提取酵母中的基因組DNA？A5不能，酵母屬于真核生物，其細(xì)胞壁的化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)與細(xì)菌不同，因此Lysozyme不能使其細(xì)胞壁溶解，所以，本試劑盒不能提取酵母中的基因組DNA。如果需要提取酵母基因組DNA，請(qǐng)用酵母提取試劑盒。Q6本試劑盒是否適用于任何菌體基因組本試劑盒是否適用于任何菌體基