熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)宮頸脫落細(xì)胞C-MYC基因擴(kuò)增的臨床研究.pdf

1、子宮頸癌(CervicalCancer，CC)是世界上嚴(yán)重威脅婦女健康的主要惡性腫瘤之一，發(fā)病率居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的第二位。全世界每年約有47萬(wàn)宮頸癌新增病例，我國(guó)每年大約有10萬(wàn)子宮頸癌新發(fā)病例；我國(guó)子宮頸癌年調(diào)整死亡率為4.3/10萬(wàn)，其中山西省的部分高發(fā)地區(qū)可達(dá)36.0/10萬(wàn)，并且有發(fā)病年輕化的趨勢(shì)。已經(jīng)證實(shí)由高危型人乳頭狀瘤病毒（highriskhumanpapillomavirus，HR-HPV）持續(xù)感染啟動(dòng)，同時(shí)伴隨其

2、他因素，經(jīng)由子宮頸的不典型增生（輕-中-重度）、原位癌、早期浸潤(rùn)癌直至發(fā)展成子宮頸浸潤(rùn)癌。流行病學(xué)研究表明子宮頸癌早期治療后5年生存率接近100％，而晚期治療5年生存率僅為20％～50％。因此，針對(duì)宮頸癌及其癌前期病變的篩查和早期診斷尤為重要。
　　 目前宮頸癌篩查的方法多采用宮頸脫落細(xì)胞檢查及HPV檢測(cè)。研究發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)巴氏細(xì)胞學(xué)檢查的特異性可高達(dá)90％以上，但由于取材不全面、涂片不均勻、細(xì)胞丟失多、過(guò)多的血液或細(xì)胞學(xué)診斷醫(yī)師的

3、主觀偏倚等諸多方面的不足，其敏感性一般只在55％～80％左右。二十世紀(jì)九十年代發(fā)明的液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)技術(shù)雖改變了常規(guī)涂片的操作方法，但在發(fā)現(xiàn)高級(jí)別CIN方面，不論是敏感性還是特異性均無(wú)顯著提高。目前已公認(rèn)，HPV感染是宮頸癌發(fā)生的必要條件，HPV檢測(cè)具有宮頸癌篩查的潛在作用。與細(xì)胞學(xué)檢查相比，HPVDNA檢測(cè)CINⅡ以上病變敏感性更高，可達(dá)95％，但特異性較低，為70％左右。多數(shù)HPV陽(yáng)性的病人在一年左右就會(huì)轉(zhuǎn)陰，意味著除了HPV感染外還

4、有其他的機(jī)制在子宮頸癌發(fā)生與進(jìn)展中發(fā)揮著作用。因而，從宮頸癌篩查及早期診斷角度出發(fā)，迫切需要其它可靠指標(biāo)或手段來(lái)協(xié)助以上檢測(cè)手段進(jìn)行綜合判斷，使宮頸癌的早期篩查更準(zhǔn)確、更可靠，更有預(yù)見(jiàn)性。
　　 近幾年分子遺傳學(xué)研究在尋找預(yù)防、早期診斷及有效的治療宮頸癌及癌前病變的方法中起到了重要作用，發(fā)現(xiàn)原癌基因在基因或蛋白水平上的改變致使細(xì)胞腫瘤轉(zhuǎn)變并損害細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控機(jī)制，從而引起腫瘤形成。其中C-MYC基因被證實(shí)是一種與腫瘤高度相關(guān)的細(xì)胞

5、癌基因。C-MYC基因定位于8q24區(qū)，在宮頸癌及癌前病變組織中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)C-MYC基因的擴(kuò)增和過(guò)度表達(dá)，該基因擴(kuò)增異常，提示可能已經(jīng)存在宮頸癌前病變，甚至是宮頸癌。因此，C-MYC基因的異常擴(kuò)增可能是宮頸癌形成的早期事件。Sokolova應(yīng)用熒光原位雜交技術(shù)(FISH)發(fā)現(xiàn)子宮頸癌及癌前病變患者存在C-MYC基因的擴(kuò)增，并且隨著病變程度加重而升高：表明C-MYC基因擴(kuò)增的情況與宮頸癌及癌前病變的病情發(fā)展程度密切相關(guān)。因此，對(duì)C-MYC基

6、因擴(kuò)增情況的檢測(cè)可能有助于子宮頸癌及癌前病變的早期診斷。熒光原位雜交技術(shù)（fluorescentinsituhybridization，F(xiàn)ISH）為目前檢測(cè)這一基因擴(kuò)增的標(biāo)準(zhǔn)方法，具有特異性強(qiáng)、敏感性高、定位精確、可定量、穩(wěn)定性好、無(wú)創(chuàng)等特點(diǎn)。故而應(yīng)用FISH技術(shù)檢測(cè)C-MYC基因的擴(kuò)增情況在一定程度上彌補(bǔ)了現(xiàn)行宮頸癌和癌前病變篩查及早期診斷方法的局限性，有望成為臨床宮頸疾病篩查和早期診斷中一項(xiàng)重要的輔助檢查。
　　 目的：

7、r>　　 本研究采用熒光原位雜交技術(shù)(FISH)檢測(cè)不同程度宮頸病變中宮頸脫落細(xì)胞C-MYC基因的擴(kuò)增情況，與細(xì)胞學(xué)、HPV感染情況及病理學(xué)金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，評(píng)估C-MYC基因檢測(cè)對(duì)宮頸癌及癌前病變篩查及早期診斷的臨床意義。
　　 方法：
　　 選擇2011年9月-2012年3月山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院婦產(chǎn)科門診自愿接受宮頸篩查者或入院接受治療者在進(jìn)行治療前檢查的住院患者共140例。每一位研究對(duì)象均進(jìn)行細(xì)胞學(xué)、HPVDNA、

8、C-MYC基因檢測(cè)和陰道鏡組織病理學(xué)檢查。根據(jù)檢查結(jié)果，將140名研究對(duì)象按細(xì)胞學(xué)分為Norm/infla、ASCUS、LSIL、HSIL及SCC組；按組織病理學(xué)分為正常、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸癌組。細(xì)胞學(xué)采用新柏氏液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)，HPVDNA采用凱普HPV基因分型檢測(cè)，C-MYC基因采用熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用X2檢驗(yàn)，設(shè)立檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05，P＜0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

9、。以組織病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，用靈敏度、特異度、假陰性率、假陽(yáng)性率、陽(yáng)性似然比、陰性似然比及Kappa系數(shù)評(píng)價(jià)三種檢測(cè)方法在宮頸病變中的診斷價(jià)值。
　　 結(jié)果：
　　 1.根據(jù)細(xì)胞學(xué)分組，C-MYC基因在Norm/lnfla組、ASCUS組、LSIL組、HSIL組及SCC組的擴(kuò)增率分別為0.0％、20.9％、45.0％、64.5％、93.8％。各組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。
　　 2.根據(jù)組織學(xué)分組，C

10、-MYC基因在正常組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組的擴(kuò)增率分別為2.6％、11.5％、44.4％、71.0％、83.3％。各組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。
　　 3.宮頸病變程度越高，C-MYC基因陽(yáng)性表達(dá)的異常細(xì)胞數(shù)目越多，核型表現(xiàn)越復(fù)雜。正常宮頸組織C-MYC基因陽(yáng)性表達(dá)的異常細(xì)胞數(shù)目為0～5，基因擴(kuò)增數(shù)量為3；低度病變(CINⅠ)異常細(xì)胞數(shù)目為0～7，基因擴(kuò)增數(shù)量為3～4；高級(jí)別病變(≥CINⅡ

11、)異常細(xì)胞數(shù)目為2～32，基因擴(kuò)增數(shù)量為3～8。
　　 4.三種檢測(cè)方法的靈敏度、特異度、假陰性率、假陽(yáng)性率、陽(yáng)性似然比、陰性似然分別為：細(xì)胞學(xué)(72.3％、81.3％、27.7％、18.7％、3.87、0.34)、HPVDNA(92.1％、57.8％、7.9％、42.2％、2.18、0.14)、C-MYC基因(64.5％、93.8％、35.5％、6.2％、10.4、0.38)。3種診斷方法的靈敏度、特異度比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

12、義(P=0.000)。
　　 5.應(yīng)用Kappa系數(shù)分析C-MYC基因檢測(cè)與細(xì)胞學(xué)及HPVDNA檢測(cè)的吻合情況，結(jié)果顯示經(jīng)加權(quán)后Kappa系數(shù)分別為0.538和0.399，P均為0.000。這三種方法有一定的吻合度，但吻合度一般。
　　 結(jié)論：
　　 1.隨著宮頸病變級(jí)別的增高，C-MYC基因的擴(kuò)增率也明顯增加，且高級(jí)別病變基因陽(yáng)性擴(kuò)增率著高于低級(jí)別病變，C-MYC基因的擴(kuò)增與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。