血液腫瘤骨髓微環(huán)境中纖維連接蛋白介導(dǎo)的化療耐藥模型的建立.pdf

1、目的：
　　 1.骨髓基質(zhì)細(xì)胞（Bone Marrow Stromal cells，BMSCs）的分離及鑒定。
　　 2.檢測骨髓基質(zhì)細(xì)胞是否表達(dá)纖維連接蛋白（Fibronectin,Fn）。
　　 3.模擬體內(nèi)腫瘤細(xì)胞與骨髓基質(zhì)中纖維連接蛋白接觸模型，驗(yàn)證纖維連接蛋白是否介導(dǎo)了血液腫瘤微小殘留病灶的產(chǎn)生，即腫瘤耐藥。
　　 方法：
　　 1.收集血液科非惡性腫瘤患者骨髓液標(biāo)本，梯度密度離心后，通

2、過貼壁法培養(yǎng)骨髓基質(zhì)細(xì)胞。直接在顯微鏡下觀察分離培養(yǎng)的BMSCs細(xì)胞形態(tài)，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測BMSCs的細(xì)胞標(biāo)志。
　　 2.細(xì)胞免疫熒光法檢測BMSCs表達(dá)Fn的表達(dá)情況。
　　 3.將包被有纖維連接蛋白的孔板與K562細(xì)胞共培養(yǎng)，MSCs細(xì)胞與K562細(xì)胞共培養(yǎng)，分別與伊馬替尼、柔紅霉素作用，然后通過流式細(xì)胞儀檢測K562細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.分離培養(yǎng)的BMSCs表面標(biāo)

3、志：CD44、CD105表達(dá)陽性（PE 標(biāo)記）；CD19、CD34和CD45表達(dá)陰性（FITC 標(biāo)記）。
　　 2.MSCs細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá)Fn，且可以分泌Fn。
　　 3.Fn 誘導(dǎo)K562細(xì)胞發(fā)生G1 期阻滯，凋亡率降低。
　　 結(jié)論：
　　 1.分離培養(yǎng)了BMSCs 可以用于建立Fn 介導(dǎo)的粘附耐藥模型。分離培養(yǎng)的BMSCs分子標(biāo)記與國際相關(guān)研究一致，可用于后期研究。
　　 2.BMSCs細(xì)胞