人食管鱗癌耐藥模型的建立和JP抗耐藥腫瘤作用研究.pdf

1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheestablishmentofdrugresistancehumanesophagealsquamouscarcinomamodelsandthestudiesonantidrug—resistanceactivitiesandmechanismsofactionofByLiubinGuoSupervisor：Asso

2、cProfCongWangMicrobialandBiochemicalPharmacySchooIofPharmaceuticalScienceApril，2014一，摘要腫瘤多藥耐藥嚴重影響化療效果，甚至導致化療失敗，所以對于耐藥機制及克服策略的研究尤為重要。本課題第一部分通過建立人食管鱗癌紫杉醇耐藥細胞株及對應的體內(nèi)耐藥模型，初步探討食管鱗癌紫杉醇耐藥的耐藥機制。第二部分利用第一部分建立的耐藥模型，研究新型抗腫瘤化合物jP的抗耐藥

3、腫瘤作用及其機制。第一部分：人食管鱗癌體內(nèi)外耐藥模型的建立本部分采用高濃度間歇誘導結(jié)合時間遞增的方法建立了人食管鱗癌紫杉醇耐藥細胞模型，采用皮下移植的方法建立了對應的體內(nèi)裸鼠移植瘤耐藥模型，并探討了兩者的生物學特性及耐藥機制。方法：以紫杉醇(Paclitaxel，PTX)為誘導藥物，人食管鱗癌ECl09細胞為親本細胞，應用高劑量間歇誘導結(jié)合時間遞增的方法，歷時6個月時間，建立了人食管鱗癌紫杉醇耐藥細胞株ECl09／Taxol。采用四甲基

4、偶氮唑鹽(MTT)法檢測耐藥細胞對紫杉醇、5氟尿嘧啶、表阿霉素、順鉑的耐藥性；連續(xù)七個月監(jiān)測耐藥細胞的耐藥穩(wěn)定性：倒置顯微鏡及熒光顯微鏡觀察紫杉醇誘導前后細胞和細胞核形態(tài)學變化；AnnexinV／PI雙染色法檢測細胞凋亡率；對比ECl09與耐藥細胞的生長曲線及倍增時間：平板克隆實驗測定親本細胞和耐藥細胞的克隆形成能力；流式細胞術(shù)對比分析親本細胞和耐藥細胞的周期分布情況：Westernblot分析產(chǎn)生耐藥前后細胞內(nèi)Bcl2、Bax、Pro

5、easpase3、PgP蛋白的表達變化情況：耐藥細胞羅丹明123(Rhl23)攝入／排出功能的檢測；利用體外耐藥模型，采用皮下移植法建立裸鼠移植瘤體內(nèi)耐藥模型，并對其耐藥性進行鑒定。結(jié)果：耐藥細胞株ECl09廠raXol對紫杉醇的耐藥指數(shù)(RJ)為67157，且耐藥性穩(wěn)定，同時對未接觸過的5氟尿嘧啶、順鉑、表阿霉素交叉耐藥。ECl09廠raX01細胞形態(tài)不規(guī)則，體積偏小，常趨于群集性生長，細胞核大而圓，結(jié)構(gòu)完整，染色均勻。耐藥細胞的自然