用于誘導多潛能性干細胞的人羊水細胞培養(yǎng)及逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝平臺的建立.pdf

1、基因治療作為一種全新的疾病治療方法,有著廣泛的應(yīng)用前景。隨著分子病理學和分子生物學等相關(guān)學科的發(fā)展,基因治療所針對的疾病也從早期的單基因遺傳病擴展到腫瘤、病毒性疾病和心血管病等嚴重威脅人類健康的疾病。在目前廣泛采用的體外基因治療策略中,靶細胞的選擇是一個關(guān)鍵因素。干細胞由于具有自我更新與多向分化潛能的特性,因此是一種理想的基因治療靶細胞。2006年出現(xiàn)的將幾種轉(zhuǎn)錄因子導入成體細胞將其誘導成為具有干細胞特性的多潛能性干細胞(iPSC)的新

2、技術(shù),更是使利用患者來源的成體細胞誘導成為干細胞后進行自體化基因治療成為可能。因此,本室利用產(chǎn)前診斷過程中的遺傳病患兒羊水細胞,通過逆轉(zhuǎn)錄病毒將其誘導成為iPS細胞,建立不同疾病特異性的iPS細胞系,進而利用我室的核糖體基因區(qū)打靶載體進行基因治療研究。本研究作為這一研究方向的前期準備,著重建立羊水細胞的培養(yǎng)和篩選技術(shù)平臺,同時建立用于誘導的逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝體系,為后續(xù)的誘導多潛能性干細胞奠定基礎(chǔ)。
　　 本研究的實驗結(jié)果顯示,在獲

3、取人羊水細胞后,用機械法去除成纖維樣細胞和上皮樣細胞的方法,能較好的純化出羊水中的短梭形細胞。利用攜帶Slc7a1受體基因的慢病毒感染純化后的短梭形細胞,使其表達Slc7a1受體,從而獲得了可用于病毒感染誘導的羊水細胞。同時,為獲得誘導所需的逆轉(zhuǎn)錄病毒,本研究成功利用Plat-E包裝細胞包裝出了可用于細胞感染的逆轉(zhuǎn)錄病毒。為檢測病毒感染能力,用包裝好的pMX-GFP對照逆轉(zhuǎn)錄病毒感染攜帶Slc7a1受體的人羊水細胞,48h后在倒置顯微鏡