逆轉(zhuǎn)錄病毒介導EGFP基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細胞及類Schwann細胞誘導分化.pdf

1、　　目的 體外擴增培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)。定向誘導MSCs為類Schwann細胞。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體法使MSCs轉(zhuǎn)染增強型綠色熒光蛋白基因(EGFP)并穩(wěn)定表達,觀測轉(zhuǎn)染后熒光表達強度及時間,轉(zhuǎn)染前后骨髓間充質(zhì)干細胞的生物學特性變化,及轉(zhuǎn)染對MSCs向類Schwann細胞誘導分化的影響。探討MSCs作為組織工程人工神經(jīng)種子細胞及利用EGFP作為體內(nèi)試驗示蹤劑的可行性。
　　方法 密度梯度離心聯(lián)合貼壁篩選法分離擴增培養(yǎng)兔骨髓

2、間充質(zhì)干細胞。采用β-巰基乙醇、全反視黃酸、福斯克林、堿性成纖維細胞生長因子、重組人血小板衍生生長因子等依次誘導MSCs向類Schwann細胞定向分化,S100免疫細胞化學染色鑒定。
　　同時用pLEGFP-N1逆轉(zhuǎn)錄病毒載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染PT67包裝細胞,提取病毒上清液后感染骨髓間充質(zhì)干細胞,G418篩選及單克隆培養(yǎng)得到穩(wěn)定表達綠色熒光蛋白的MSCs細胞(EGFP-MSCs)。觀察測定轉(zhuǎn)染前后骨髓間充質(zhì)干細胞的生長曲線,細胞活性和貼壁