miR-29b在前列腺癌中的表達及其作用和機制的初步探討.pdf

1、第一部分 miR-29b在前列腺癌組織中的表達及臨床意義
　　目的:探討miR-29b在前列腺癌組織中的表達及其臨床意義。
　　方法:用實時定量PCR技術檢測10例前列腺癌(PCa)及癌旁非腫瘤組織中miR-29b的表達情況，研究其與PCa病理分期、分級之間的關系。
　　結(jié)果:10例前列腺癌組織(prostate cancer, PCa)與配對的癌旁非腫瘤組織相比，miR-29b在PCa中的表達明顯下調(diào)，有統(tǒng)計學差異(

2、p＜0.05)。根據(jù)TNM病理分期，其中T1-T2患者7例和T3b患者3例，兩組的miR-29b無統(tǒng)計學差異(p＞0.05);根據(jù)Gleason評分進行病理分級，其中G1-G2患者4例，G3-G4患者6例，兩組miR-29b表達相比無統(tǒng)計學差異(p＞0.05）。
　　結(jié)論:(1) miR-29b在前列腺癌組織中的表達明顯低于癌旁組織。
　　(2) miR-29b的表達與PCa病理分期及病理分級沒有明顯相關性。
　　第二

3、部分 miR-29b在不同前列腺癌細胞株中的表達
　　目的:探討miR-29b在不同前列腺癌細胞株中的表達及其與細胞惡性程度和雄激素依賴性的相關性，選擇miR-29b表達相對較低的細胞株進行下一步實驗。
　　方法:選取PC3、DU145、LNCap、LNCap-AI四種細胞系，其中PC3、DU145、LNCap為來源不同的細胞系。PC3和DU145具有惡性程度高且雄激素非依賴生長的特點，LNCap惡性程度低且雄激素依賴生長，

4、而LNCap和LNCap-AI來源相同，LNCap-AI為LNCap在逐步去雄激素環(huán)境下培養(yǎng)出的雄激素非依賴細胞。用實時定量PCR技術檢測這四種前列腺癌細胞株中miR-29b的表達情況。
　　結(jié)果:四種前列腺癌細胞系中表達水平由高到低分別為DU-145、PC-3、LNCap、LNCap-AI，四組間具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。其中DU-145、PC-3中的miR-29b表達水平明顯高于LNCap，而LNCap細胞中miR-29

5、b表達水平高于LNCap-AI細胞。
　　結(jié)論:(1) miR-29b在不同的前列腺癌細胞系中有不同的表達水平，且與雄激素非依賴性轉(zhuǎn)化過程有相關性。
　　(2) LNCap細胞株中miR-29b表達相對較低，選擇LNCap細胞株進行下一步實驗。
　　第三部分 miR-29b對前列腺癌細胞生物學行為的影響
　　目的:探討miR-29b對前列腺癌細胞化療藥物敏感性、細胞周期、增殖、凋亡及侵襲能力等細胞生物學行為的影響

6、。
　　方法:構建miR-29b模擬物片段及干預序列，并轉(zhuǎn)染到LNCap細胞中。在熒光鏡下計算細胞轉(zhuǎn)染效率并用實時定量PCR檢測LNCap轉(zhuǎn)染細胞株中miR-29b的表達水平。分別用MTT法檢測上調(diào)miR-29b對順鉑化療作用的影響，觀察細胞的存活率的變化，用流式細胞術檢測細胞周期變化，AV/PI雙標法FCM檢測細胞的凋亡情況，Transwell細胞侵襲實驗觀察細胞浸襲能力。
　　結(jié)果:成功構建miR-29b模擬物片段及干預

7、序列，并轉(zhuǎn)染到LNCap細胞中，細胞的轉(zhuǎn)染效率達到80％以上。與陰性對照組相比:miR-29b模擬物轉(zhuǎn)染組癌細胞細胞存活率明顯下降，而miR-29b模擬物加順鉑組細胞存活率進一步下降，miR-29b可以增加癌細胞對順鉑的化療敏感性;miR-29b模擬物轉(zhuǎn)染組亞G0/G1期明顯增加，G0/G1期、S期、G2/M期比例均減少，癌細胞增殖能力下降;AV/PI雙標法FCM試驗顯示miR-29b模擬物轉(zhuǎn)染組細胞總凋亡率明顯下降;Transwell

8、細胞侵襲實驗顯示miR-29b模擬物轉(zhuǎn)染組細胞侵襲數(shù)量明顯減少。
　　結(jié)論:miR-29b高表達可以抑制前列腺癌細胞的增殖和侵襲能力，促進癌細胞凋亡并且增加癌細胞對化療藥物敏感性。
　　第四部分前列腺癌中miR-29b作用靶基因的初步篩查
　　目的:初步探討前列腺癌中miR-29b可能的作用靶基因。
　　方法:生物信息學技術及查閱文獻的方法預測miR-29b可能的靶基因，Western-blot檢測LNCap細胞

9、株中各預測靶基因蛋白的表達情況。
　　結(jié)果:用生物信息學技術預測出8個miR-29b可能作用的靶基因:SOCS-1、Mcl-1、DNMT3b、MMP2、IFN-γ、SMAD3、SOCS5、AKT3。WB檢測miR-29b表達變化后8種可能靶基因的蛋白變化，其中AKT3、Mcl-1和DNMT3b的蛋白表達在miR-29b模擬物轉(zhuǎn)染組有明顯下降，在miR-29b抑制物轉(zhuǎn)染組有明顯上升(P＞0.05)。
　　結(jié)論:AKT3、Mcl