LASP-1在前列腺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及其機制研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進行論述：
　　第一部分 LASP-1在前列腺癌組織中的表達及其與臨床病理資料的相關(guān)性分析
　　研究目的:前列腺癌是男性生殖系統(tǒng)最常見惡性腫瘤，在世界范圍內(nèi)前列腺癌在男性惡性腫瘤中發(fā)病率排名第二位。近年來，在我國前列腺癌發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢，嚴(yán)重威脅著男性的健康。雖然前列腺癌是比較惰性的腫瘤，有些可多年保持穩(wěn)定，但是另外一些患者卻可以出現(xiàn)早期轉(zhuǎn)移，預(yù)后不良甚至致死，另一方面根據(jù)目前前列腺癌的臨床分期、G

2、leason評分和PSA水平，甚至三者聯(lián)合應(yīng)用也無法準(zhǔn)確的判斷前列腺癌的進展和預(yù)后，因此可能導(dǎo)致對一些真正低危的前列腺癌患者產(chǎn)生過度治療，影響患者的生活質(zhì)量，而對于另外一些需要放化療或內(nèi)分泌治療的高危患者則有可能造成忽視，延誤治療，本研究的目的是探索更有效的前列腺癌發(fā)進展的生物預(yù)測因子，從而更精準(zhǔn)地指導(dǎo)前列腺癌的個性化治療。
　　研究方法:①收集2015年1月-2016年12月在山東大學(xué)第二醫(yī)院32例確診為前列腺癌并行前列腺癌根治

3、術(shù)的組織標(biāo)本，15例為新鮮組織標(biāo)本，同期收集15例良性前列腺增生組織標(biāo)本。②隨機選取10份癌組織和癌旁組織樣本進行基因芯片檢測。③經(jīng)基因芯片分析并查閱文獻篩選出在癌組織中高表達的LASP-1做為研究對象。④免疫組織化學(xué)(IHC)、qPCR和western blot檢測LASP-1在癌組織和對照組織中的表達，同時觀察NF-κB通路中p65和IκBα在組織中的表達。⑤統(tǒng)計患者臨床信息，包括TNM分期、病理gleason評分、血tPSA和fP

4、SA值、全身骨ECT掃描檢查結(jié)果，分析組織標(biāo)本中LASP-1表達水平與上述指標(biāo)的相關(guān)性。
　　研究結(jié)果:①IHC、qPCR和western blot結(jié)果顯示，與對照組織相比，LASP-1在前列腺癌組織中高表達。②LASP-1表達與臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析:IHC顯示癌組織中LASP-1蛋白表達水平與血清PSA水平、臨床TNM分期和gleason評分無明顯相關(guān)性，但是在高危（PSA＞20ng/ml且/或Gleason評分≥8）癌組織的表

5、達高于中低危者(PSA≦20ng/ml且Gleason評分＜8);LASP-1染色部位主要位于細胞漿，高危患者癌組織細胞漿染色強度增高，同時陽性染色的細胞核明顯增加。③qPCR和western blot顯示NF-κB通路中p65和IκBα在癌組織中高表達;IHC顯示p65主要表達于細胞核，癌組織陽性染色細胞核明顯多于癌旁及前列腺增生組織。26例(81.3％)前列腺癌組織標(biāo)本中LASP-1和p65同時高表達。
　　研究結(jié)論:①LAS

6、P-1在前列腺癌組織中高表達。②高危前列腺癌組織中LASP-1表達高于中低危者。③LASP-1在前列腺癌細胞漿中高表達和細胞核陽性表達，可能是前列腺癌高侵襲能力和不良預(yù)后的預(yù)測指標(biāo)。④NF-κB通路與前列腺癌有關(guān)（與文獻報道相同）。
　　第二部分 LASP-1通過NF-κB通路調(diào)控前列腺癌的發(fā)生發(fā)展
　　研究目的:第一部分發(fā)現(xiàn)LASP-1、NF-κB通路與前列腺癌有關(guān)，本部分進一步探討在前列腺癌細胞系中LASP-1對癌細胞增

7、殖、侵襲與遷移能力的影響以及對NF-κB通路的調(diào)控，以研究LASP-1對前列腺癌進展的影響和作用機制。
　　研究方法:①采用ShRNA干擾前列腺癌細胞系（PC3和Du145）中LASP-1的表達。②RT-qPCR和western blot分別檢測ShRNA干擾后LASP-1、p65、IκBα mRNA水平以及LASP-1、p65、IκBα和p-IκBα蛋白水平的表達。③CCK-8法檢測ShRNA干擾后細胞增殖活力的改變。④流式細胞

8、術(shù)檢測在ShRNA干擾后細胞的凋亡和周期阻滯情況。⑤平板克隆實驗檢測ShRNA干擾后細胞的克隆形成能力的改變。⑥Transwell實驗檢測ShRNA干擾后細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。⑦免疫熒光檢測ShRNA干擾后LASP-1、p65、IκBα和p-IκBα的表達。
　　研究結(jié)果:①用ShRNA干擾細胞中LASP-1的表達后，PC3和Du145細胞的增殖能力均下降。②用ShRNA干擾細胞中LASP-1的表達后，細胞凋亡數(shù)量增加。③用ShR

9、NA干擾細胞中LASP-1的表達后，細胞周期發(fā)生阻滯，阻滯在G1/S期。④用ShRNA干擾細胞中LASP-1的表達后，細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力下降。⑤用ShRNA干擾細胞中LASP-1的表達后，PC3細胞和Du145細胞中p65和IκBα mRNA水平以及p-IκBα、p65和IκBα蛋白水平均表達下降，LASP-1、p65、IκBα和p-IκBα在細胞核和細胞漿中均有表達。
　　研究結(jié)論:①LASP-1與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，

10、干擾前列腺癌細胞中LASP-1的表達后，細胞增殖、克隆、侵襲與轉(zhuǎn)移能力均下降。②LASP-1可以通過NF-κB通路調(diào)控前列腺癌的發(fā)生發(fā)展。③LASP-1可能是治療前列腺癌的靶點之一。
　　第三部分 動物實驗驗證LASP-1在前列腺癌體內(nèi)轉(zhuǎn)移中的作用
　　研究目的:臨床組織標(biāo)本和細胞實驗證明LASP-1與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，本部分目的是通過體內(nèi)動物實驗進一步驗證LASP-1對前列腺癌轉(zhuǎn)移的作用。
　　研究方法:①

11、將C57BL/6J小鼠隨機分成四組，每組10只，其中兩組分別心室內(nèi)注射轉(zhuǎn)染ShRNA-nc的PC3細胞和Du145細胞，另外兩組分別心室內(nèi)注射轉(zhuǎn)染有ShRNA-LASP1的PC3細胞和Du145細胞，建立小鼠體內(nèi)腫瘤模型。②1-2周左右，經(jīng)小動物活體成像系統(tǒng)檢測腫瘤的轉(zhuǎn)移情況。
　　研究結(jié)果:注射ShRNA-LASP1細胞的小鼠體內(nèi)熒光強度弱于注射ShRNA-nc細胞的小鼠，說明干擾前列腺細胞中LASP-1的表達后，癌細胞在體內(nèi)的