Caveolin-1對人小細胞肺癌細胞系NCI-H446生長和侵襲作用的體外研究.pdf

1、目的：惡性腫瘤是當(dāng)今世界上嚴重危害人類健康的重大疾病之一，肺癌發(fā)病率和死亡率位居惡性腫瘤之首。惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移所導(dǎo)致的多臟器功能衰竭是患者死亡的主要原因。目前，臨床上防止腫瘤轉(zhuǎn)移是治療腫瘤的關(guān)鍵之一。隨著對腫瘤分子生物學(xué)的深入研究，人們發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜而主動的生物學(xué)過程，它包括癌細胞在原發(fā)灶增殖、脫落、侵入轉(zhuǎn)移點并增殖，在這個過程中存在著癌基因的激活和抑癌基因的失活等一系列遺傳學(xué)的改變。 Caveolae是細胞膜內(nèi)陷形

2、成的特殊膜結(jié)構(gòu)，參與細胞的物質(zhì)運輸和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。Caveolin-1是Caveolae中的重要蛋白，與細胞內(nèi)多種信號分子相互作用。上世紀(jì)90年代后期有研究發(fā)現(xiàn)，Caveolin-1可以影響細胞的增殖、凋亡、惡性轉(zhuǎn)化及血管的生長：是近年來腫瘤研究的熱點之一，但是Caveolin-1與肺癌的相關(guān)研究較少，國內(nèi)外近乎沒有系列報道。本文旨在探討Caveolin-1基因?qū)θ诵〖毎伟┘毎礜CI-H446生長和體外侵襲力的影響。 方法：we

3、stern blot檢測Caveolin-1在人肺癌細胞系A(chǔ)549、NCI-H460、NCI-H446中的表達。用脂質(zhì)體法將已構(gòu)建的Caveolin-1真核表達載體導(dǎo)入到Caveolin-1基因缺失的人小細胞肺癌細胞NCI-H446中，經(jīng)G418篩選獲得可穩(wěn)定表達Caveolin-1的人小細胞肺癌細胞H-446Cavl陽性克隆和對照陰性克隆H-446neo。western blot和免疫細胞化學(xué)方法鑒定陽性克隆。用噻唑藍(MTT)法觀察

4、細胞增殖，結(jié)晶紫染色光學(xué)顯微鏡觀察細胞形態(tài)，用Transwell小室法和劃痕實驗觀察細胞體外侵襲、遷移能力的變化。用western blot和明膠酶譜方法檢測Caveolin-1蛋白表達對MMP-3表達及酶活性的影響，用western blot方法檢測Caveolin-1表達對E-cadherin表達的影響。結(jié)果：western blot檢測在人小細胞肺癌細胞NCI-H446中Caveolin-1表達缺失。western blot和免疫

5、組織化學(xué)方法鑒定獲得穩(wěn)定表達細胞克隆：陽性克隆H-446Cavl和陰性克隆H-446neo。通過細胞形態(tài)學(xué)觀測發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染目的基因后的細胞形態(tài)發(fā)生了明顯改變，轉(zhuǎn)染前NCI-H446細胞較小，偽足短，細胞呈克隆生長；轉(zhuǎn)染后H446-Cavl細胞體積增大，多突起，細胞生長較分散不呈克隆樣生長。生長曲線表明H446-Cavl細胞增殖水平明顯低于NCI-H446、H446neo細胞(P<0.05)。Transwell實驗結(jié)果表明H446-Cavl

6、細胞穿透Matrigel膠細胞數(shù)較陰性克隆H-446neo明顯增多(P<0.05)。細胞遷移實驗結(jié)果表明H446-Cavl遷移速度明顯高于NCI-H446、H446neo細胞(P<0.05)。用western blot檢測各細胞上清中MMP-3的表達，H446-Cavl與H446neo相比MMP-3表達明顯增高(P<0.05)。明膠酶譜方法檢測細胞上清中MMP-3活性，H446-Cavl上清中MMP-3活性明顯高于H446neo(P<0

7、.05)。用western blot檢測細胞中E-Cadherin的表達，H446-Cav1與H446neo、NCI-H446相比E-Cadherin表達明顯降低(P<0.05)。 結(jié)論：1．人小細胞肺癌細胞系NCI-H446可以作為Caveolin-l基因體外研究的模型。2．Caveolin-l抑制小細胞肺癌細胞生長、增殖。3．Caveolin-l可以提高小細胞肺癌細胞體外侵襲和遷移能力。4．Caveolin．1可能通過下調(diào)E