人肺癌細(xì)胞系NCI-H1650中干細(xì)胞的分離及鑒定.pdf

1、背景：
　　肺癌發(fā)病率高，惡性程度高，預(yù)后差，死亡率高，占腫瘤相關(guān)死亡的首位。CSCs是一群異質(zhì)性細(xì)胞，能自我更新并有無限增殖和多向分化潛能。肺癌干細(xì)胞與肺癌的發(fā)生發(fā)展，維持，侵襲轉(zhuǎn)移，復(fù)發(fā)，耐藥等密切相關(guān)。因此，對肺癌干細(xì)胞的研究可為肺癌提供更多的治療方向。然而肺癌中肺癌干細(xì)胞含量極少，有效分離得到肺癌干細(xì)胞是進(jìn)行肺癌干細(xì)胞研究的重要基礎(chǔ)。我們將采用兩種不同的方式來分離人肺癌細(xì)胞系NCI-H1650中的干細(xì)胞。
　　目的：

2、
　　分離出入肺癌細(xì)胞系NCI-H1650中的干細(xì)胞并進(jìn)行鑒定。
　　方法：
　　1.應(yīng)用無血清培養(yǎng)聯(lián)合紫杉醇刺激的方法誘導(dǎo)NCI-H1650干細(xì)胞。
　　2.流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光檢測誘導(dǎo)細(xì)胞表面CD133和CD326表達(dá);采用RT-PCR和Western blot檢測干性基因Oct-4、Nanog、Sox-2。
　　3.應(yīng)用免疫磁珠分選法分選NCI-H1650干細(xì)胞。
　　4.免疫熒光檢測磁珠分選細(xì)

3、胞表面CD133和CD326表達(dá);采用RT-PCR和Western blot檢測干性基因Oct-4、Nanog、Sox-2。
　　結(jié)果：
　　1.誘導(dǎo)NCI-H1650干細(xì)胞在SFM中呈球形生長。
　　2.誘導(dǎo)NCI-H1650干細(xì)胞表達(dá)干細(xì)胞表面標(biāo)志CD133和CD326。
　　3.誘導(dǎo)NCI-H1650干細(xì)胞表達(dá)干性基因Oct-4、Nanog、Sox-2。
　　4.磁珠分選細(xì)胞在SFM中呈球形生長。

4、r>　　5.磁珠分選細(xì)胞表達(dá)干細(xì)胞表面標(biāo)志CJ133和CD326。
　　6.磁珠分選細(xì)胞表達(dá)干性基因Oct-4、Nanog、Sox-2。
　　結(jié)論：
　　1.無血清培養(yǎng)聯(lián)合紫杉醇刺激能有效誘導(dǎo)NCI-H1650干細(xì)胞，并高表達(dá)CSCs表面標(biāo)志CD133和CD326，高表達(dá)CSCs相關(guān)基因Oct-4、Nanog和Sox-2。
　　2.免疫磁珠分選法能有效分選出NCI-H1650干細(xì)胞，并高表達(dá)CSCs表面標(biāo)志CD1