U251細(xì)胞系中腫瘤干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定及原位移植瘤模型的建立.pdf

1、目的：本研究旨在從U251細(xì)胞系中分離、培養(yǎng)和鑒定腦腫瘤干細(xì)胞，觀察其生長(zhǎng)特征，并初步比較它們和人胚胎神經(jīng)干細(xì)胞的異同。建立以U251細(xì)胞系來(lái)源的腦腫瘤干細(xì)胞為移植物的動(dòng)物模型。為腦腫瘤干細(xì)胞的進(jìn)一步研究打下基礎(chǔ)。 方法：應(yīng)用簡(jiǎn)化的無(wú)血清培養(yǎng)基和懸浮培養(yǎng)法培養(yǎng)U25l細(xì)胞，并將獲得的腦腫瘤干細(xì)胞接種于含血清培養(yǎng)基中觀察其分化；交替用含血清培基和無(wú)血清培基培養(yǎng)U251細(xì)胞，觀察其生長(zhǎng)特性；利用人胚胎海馬組織分離和培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞作為

2、對(duì)照，觀察神經(jīng)干細(xì)胞和腦腫瘤干細(xì)胞在各方面的異同；用含DMSO的凍存液和液氮冷凍保存腦腫瘤干細(xì)胞；利用BrdU摻入實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腦腫瘤干細(xì)胞在形成克隆性細(xì)胞團(tuán)過(guò)程中的增殖情況；用免疫熒光法檢測(cè)腦腫瘤干細(xì)胞在誘導(dǎo)分化前后表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志物CDl33、Nestin和成熟神經(jīng)細(xì)胞表型NeuN、NSE、GFAP、CNPase的情況；利用免疫磁珠分選方法分離原代腫瘤細(xì)胞中的CDl33陽(yáng)性細(xì)胞，以觀察CDl33陽(yáng)性和陰性腫瘤細(xì)胞在體外增殖；通過(guò)將腦腫瘤

3、干細(xì)胞移植入BALB／c裸鼠顱內(nèi)的方法建立原位移植瘤模型。 結(jié)果：U251細(xì)胞接種至無(wú)血清培養(yǎng)基后，部分細(xì)胞能夠存活并增殖為懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞球，并具有很強(qiáng)的自我更新和增殖能力；這種懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含血清培基中后可貼壁分化；U251細(xì)胞在含血清培基和無(wú)血清培基中交替培養(yǎng)時(shí)能夠快速轉(zhuǎn)換生長(zhǎng)方式；可以通過(guò)細(xì)胞凍存與復(fù)蘇技術(shù)長(zhǎng)期保存腦腫瘤干細(xì)胞，但對(duì)細(xì)胞活力有影響；腦腫瘤干細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞有很多相似性，但也在增殖能力、分化的細(xì)胞種類等方

4、面存在明顯區(qū)別；腦腫瘤干細(xì)胞中CDl33和Nestin表達(dá)陽(yáng)性，腫瘤干細(xì)胞球中的部分細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞的分化腫瘤細(xì)胞均可以具有神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞的表型；以CDl33為標(biāo)志物，利用免疫磁珠細(xì)胞分離技術(shù)可以獲得純度較高的、具有體外增殖的腦腫瘤干細(xì)胞；腦腫瘤干細(xì)胞可以在裸鼠顱內(nèi)導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。 結(jié)論：U251人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中含一定比例腦腫瘤干細(xì)胞，此種細(xì)胞可在體外分離，培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化；腦腫瘤干細(xì)胞具有自我更新和多向分化能力