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文檔簡介
1、目的:探討STAT3在膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中的表達(dá)情況及在U251細(xì)胞中導(dǎo)入SiRNA-STAT3后STAT3以及與STAT3相關(guān)的P53、P21、Cyclin A、Cyclin E的表達(dá)趨勢和細(xì)胞的生長情況,進一步探討STAT3對膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞周期的影響以及可能的機制。
方法:通過免疫組化(SP)法,檢測膠質(zhì)瘤組織中STAT3的表達(dá)情況,后將SiRNA-STAT3轉(zhuǎn)染入膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞后,利用Western blot檢測
2、轉(zhuǎn)染前后膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中STAT3的表達(dá)情況,對轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞通過MTT法檢測細(xì)胞的增殖活性,用劃痕實驗檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的遷移情況。最后用Western blot檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞內(nèi)P53、P21、Cyclin A、Cyclin E蛋白的表達(dá)情況以及變化趨勢。
結(jié)果:1.免疫組化結(jié)果顯示:膠質(zhì)瘤組織中STAT3呈現(xiàn)高表達(dá)。2.Western blot結(jié)果顯示:SiRNA-STAT3轉(zhuǎn)染前后STAT3的表達(dá)情況與空白組(Mock組
3、)、空載組相比較,SiRNA-STAT3組的STAT3的表達(dá)在轉(zhuǎn)染后明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),而Mock組和空載組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。轉(zhuǎn)染后P53、P21蛋白表達(dá)增強,而Cyclin A、Cyclin E蛋白表達(dá)減弱,SiRNA-STAT3組與Mock組及空載組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),Mock組和空載組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。3.MTT結(jié)果顯示:與空載組和Mock組相比,SiRNA-STAT3組細(xì)胞增殖明
4、顯減慢(P<0.05)。4.劃痕實驗結(jié)果顯示:劃痕24h后,Mock組細(xì)胞就已經(jīng)遷移越過劃痕范圍,空載組遷移能力較正常細(xì)胞略差,而SiRNA-STAT3組進入空白處的細(xì)胞明顯減少,細(xì)胞遷移能力受到抑制。
結(jié)論:1.通過轉(zhuǎn)染獲得低表達(dá)或不表達(dá)STAT3的U251細(xì)胞模型,STAT3表達(dá)下降會抑制膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖,并使P21、P53在蛋白水平表達(dá)增高;Cyclin A、CyclinE在蛋白水平表達(dá)降低。2.通過轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤U2
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