冬凌草甲素誘導(dǎo)人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見的一種腫瘤，約占顱內(nèi)原發(fā)腫瘤的50％。由于膠質(zhì)瘤呈浸潤性、擴(kuò)展性生長，腫瘤組織與周圍正常腦組織常無明顯邊界，手術(shù)很難根除；另外膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)射線不敏感，常規(guī)化療藥物效果不佳，使得術(shù)后患者的復(fù)發(fā)率高，生存期短，目前臨床尚缺乏滿意的治療手段。冬凌草甲素是從唇形科香茶菜屬植物中提取出來的一種四環(huán)二萜類化合物，近期實(shí)驗(yàn)室和臨床研究表明其有廣泛的抗菌、抗病毒和消炎作用，尤其是它的抗腫瘤活性引起了人們的廣泛關(guān)注。本課題以人腦

2、膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞為研究對(duì)象，探討冬凌草甲素對(duì)人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞體外生長抑制及誘導(dǎo)凋亡的作用及其機(jī)制，為冬凌草甲素臨床治療膠質(zhì)瘤提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：不同濃度冬凌草甲素作用于U251細(xì)胞不同時(shí)間后，用MTT法檢測冬凌草甲素對(duì)U251細(xì)胞的生長抑制作用；32μmol/L冬凌草甲素作用U251細(xì)胞24h后，用倒置顯微鏡法觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，然后用AnnexinV-FITC/PI雙染色法在熒光顯微鏡下觀察著色后細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變

3、化；將不同濃度冬凌草甲素作用U251細(xì)胞24h后，AnnexinV-FITC/PI雙染色，用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率；32umol/L冬凌草甲素作用于U251細(xì)胞不同時(shí)間后，提取細(xì)胞總RNA和進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，檢測bc1-2、bax及caspase-3基因表達(dá)水平的變化情況。
　　 結(jié)果：冬凌草甲素對(duì)U251細(xì)胞有明顯的生長抑制作用，呈明顯的時(shí)間和濃度效應(yīng)關(guān)系（P＜0.05）。冬凌草甲素作用U251細(xì)胞24小時(shí)后出現(xiàn)染

4、色質(zhì)邊集，細(xì)胞核碎片化，凋亡小體形成，細(xì)胞膜被AnnexinV-FITC染成綠色等明顯的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變。隨著冬凌草甲素作用濃度增加，U251細(xì)胞的凋亡率相應(yīng)增加，濃度越高，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用越明顯（P＜0.05）。隨著冬凌草甲素作用時(shí)間延長，凋亡U251細(xì)胞的bax和caspase-3基因的表達(dá)逐漸增強(qiáng)，bcl-2基因的表達(dá)逐漸減弱。（P＜0.05）
　　 結(jié)論：冬凌草甲素能誘導(dǎo)人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞凋亡，其凋亡機(jī)理可能與b