廣州管圓線蟲半乳凝素基因的克隆表達(dá)、蛋白純化及免疫反應(yīng)性研究.pdf

1、廣州管圓線蟲病(Angiostrongyliasjs)是由廣州管圓線蟲(Angiostrongyluscantonensis)感染而引起的。作為一種新發(fā)的食源性傳染性疾病，廣州管圓線蟲病在全球的流行都呈現(xiàn)出上升的趨勢，對(duì)人類的威脅也越來越大。廣州管圓線蟲主要侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)，引起嗜酸性粒細(xì)胞增多性腦膜炎或腦膜腦炎。患該病后，絕大多數(shù)患者有頭痛、肌肉痛、惡心、嘔吐、感覺異常、觸摸痛、發(fā)熱、畏光、視力模糊、嗜睡、頸硬等癥狀。其中以頭痛最突出

2、，患者自訴“頭痛欲裂”或忍受不了；全身疼痛、皮膚過敏的現(xiàn)象也比較嚴(yán)重；個(gè)別病人還會(huì)出現(xiàn)精神病樣癥狀。我國是廣州管圓線蟲病的主要流行區(qū)之一，近幾年的發(fā)病數(shù)逐漸增多，甚至出現(xiàn)了爆發(fā)流行。如何有效地防治廣州管圓線蟲病已成為亟待解決的重要問題。 在廣州管圓線蟲病的防治工作中，診斷是關(guān)鍵。診斷明確，治療及時(shí)，則病人的轉(zhuǎn)歸一般良好。但目前國內(nèi)外都還缺乏敏感特異、能產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)、標(biāo)準(zhǔn)化的診斷試劑盒。針對(duì)目前這個(gè)難點(diǎn)問題，本論文進(jìn)行了以下研究：

3、 一、廣州管圓線蟲半乳凝素基因的獲取及生物信息學(xué)分析應(yīng)用EST策略，從廣州管圓線蟲腦期幼蟲cDNA文庫中克隆了半乳凝素基因(AcGal)的全長cDNA序列，并已在GenBank中登錄(登錄號(hào)為DQ384534)。AcGal基因與秀麗桿線蟲半乳凝素-10 高度同源。從保守結(jié)構(gòu)域的搜索結(jié)果可知，AcGal具有半乳凝素結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域能專一性地與β-半乳糖苷結(jié)合，如乳糖，而不需要金屬離子的活化。半乳凝素以二聚體或三聚體結(jié)構(gòu)域存在。

4、 二、廣州管圓線蟲半乳凝素基因在大腸桿菌中的表達(dá)及免疫反應(yīng)性分析PCR擴(kuò)增AcGal cDNA全長序列后克隆入pET32a(+)載體進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，包涵體經(jīng)洗滌、變性、逐步透析復(fù)性，濃縮后進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳及免疫印跡。AcGal基因在大腸桿菌中以包涵體的形式表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物與感染廣州管圓線蟲的大鼠血清有明顯的免疫反應(yīng)性，具有診斷用抗原的應(yīng)用前景。 綜上所述，本研究利用本室構(gòu)建的廣州管圓線蟲幼蟲cDNA文庫首次篩選克隆了廣州管圓