多個(gè)基因參與microRNA-107在透明細(xì)胞腎癌中發(fā)揮抑制作用.pdf

1、目的:腎癌對(duì)放化療不敏感，對(duì)于腎癌的治療目前仍以手術(shù)治療為主，由于早期缺乏敏感及特異的檢測指標(biāo)，30％的患者發(fā)現(xiàn)腫瘤已經(jīng)有了轉(zhuǎn)移。因此亟待尋求一種新的基因位點(diǎn)作為腎癌早期篩查標(biāo)記以及生物治療的靶點(diǎn)，研究熱門的microRNA有望成為新的研究目標(biāo)。本研究選擇miR-107作為研究對(duì)象，主要通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)來評(píng)估m(xù)iR-107在透明細(xì)胞腎癌中的作用效果，并進(jìn)一步探討其在腫瘤中發(fā)揮作用的機(jī)制。
　　材料與方法:通過qRT-PCR檢測miR

2、-107在52對(duì)透明細(xì)胞腎癌組織及對(duì)應(yīng)癌旁組織中中表達(dá)水平的不同，并進(jìn)一步在三種腎細(xì)胞系786-O，ACHN和HKC中驗(yàn)證表達(dá)的差異性，通過轉(zhuǎn)染化學(xué)合成的模擬生物體內(nèi)源的miR-107 mimics及感染重組的過表達(dá)miR-107慢病毒質(zhì)粒來研究miR-107對(duì)透明細(xì)胞腎癌細(xì)胞的作用及其作用機(jī)制。為了明確在透明細(xì)胞腎癌中miR-107發(fā)揮作用的靶基因，在運(yùn)用生物信息學(xué)預(yù)測可能的靶基因的基礎(chǔ)上，利用熒光素酶試驗(yàn)以及Western Blot

3、等方法證實(shí)了EIF5基因是miR-107發(fā)揮作用靶基因。同時(shí)通過Western Blot、qRT-PCR等手段發(fā)現(xiàn)p53、VHL等多個(gè)基因參與miR-107在透明細(xì)胞腎癌組織中發(fā)揮抑癌作用。
　　結(jié)果:利用qRT-PCR的方法，發(fā)現(xiàn)相對(duì)于正常組織，miR-107在透明細(xì)胞腎癌組織中表達(dá)明顯下調(diào);同樣地，相對(duì)于正常腎臟上皮細(xì)胞，miR-107在透明細(xì)胞腎癌細(xì)胞系中表達(dá)是明顯下降。體外實(shí)驗(yàn)中，過表達(dá)的miR-107的透明細(xì)胞腎癌細(xì)胞的

4、增殖及侵襲能力受到明顯抑制，裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)過表達(dá)的miR-107可以抑制腎癌腫瘤的生長。miR-107對(duì)腎癌細(xì)胞發(fā)揮抑制作用的機(jī)制探索方面，miR-107能夠誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯在G2/M期。證實(shí)了在透明細(xì)胞腎癌中EIF5是miR-107發(fā)揮作用的靶基因，Notch2、NF1以及VEGFA是miR-107潛在的可能的靶基因，p53和VHL等基因共同參與調(diào)節(jié)miR-107表達(dá)水平。
　　結(jié)論:在多種基因參與調(diào)節(jié)下，miR-107以EI