左旋肉堿對(duì)順鉑損傷大鼠腎臟保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 順鉑(順式二氨二氯鉑，Cis-diamminedichloroplatinum，DDP)是當(dāng)前臨床上應(yīng)用較廣泛的一種有效的廣譜抗腫瘤化療藥物，主要用于頭頸部癌、睪丸癌、卵巢癌等腫瘤的治療，其副作用有嚴(yán)重的消化道癥狀、骨髓抑制、神經(jīng)毒性和腎毒性等，其中腎毒性是順鉑主要?jiǎng)┝肯拗菩远拘?。防治順鉑腎毒性是順鉑化療腫瘤患者的重要臨床醫(yī)療問(wèn)題之一。因此，積極探討對(duì)化療藥物腎毒性防護(hù)的研究具有重要的臨床意義。左旋肉堿(L-Carnit

2、ine，LC)是一種天然存在的營(yíng)養(yǎng)素，是具有多種生理功能的氨基酸類物質(zhì)。LC能促進(jìn)長(zhǎng)鏈脂肪酸進(jìn)入線粒體，進(jìn)行β-氧化，從而抑制長(zhǎng)鏈脂肪酸異常升高對(duì)膜/脂質(zhì)雙分子的破壞，穩(wěn)定線粒體膜，抑制細(xì)胞色素C介導(dǎo)的線粒體依賴性細(xì)胞凋亡，對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)作用。此外，LC還具有抗氧化作用。本研究通過(guò)觀察和研究LC對(duì)順鉑損傷大鼠腎功能、腎臟脂質(zhì)過(guò)氧化狀態(tài)、腎臟組織形態(tài)學(xué)及腎臟細(xì)胞凋亡的影響，研究其化學(xué)防護(hù)效果，以期為腫瘤患者化療腎臟損傷的臨床防護(hù)和治療提供

3、實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 清潔級(jí)成年雌性Wistar大鼠36只，體重190-210克，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(Control組)、化療模型組(DDP組)、干預(yù)組(LC+DDP組)三組，每組12只。Control組和DDP組喂飼常規(guī)飼料，LC+DDP組喂飼含1％LC的常規(guī)飼料，各組均自由進(jìn)食和飲水。喂飼7天后，DDP組和LC+DDP組腹腔注射順鉑(5mg/Kg體重)，Control組腹腔注射等容量的生理鹽水。繼續(xù)喂飼4天，斷頭處死大

4、鼠取材。觀察指標(biāo)包括：檢測(cè)血清Cr、BUN水平，腎組織勻漿MDA、GSH水平，光鏡下觀察病理結(jié)構(gòu)改變，透射電鏡下觀察超微結(jié)構(gòu)變化，TUNEL法測(cè)腎臟原位細(xì)胞凋亡，免疫組化法觀察細(xì)胞色素C和Bcl-2的表達(dá)。 結(jié)果： 1.大鼠腎功能測(cè)定：血清Cr水平(μmol/L)：Control組、DDP組、LC+DDP組分別為49.30+7.19、151.00±36.28、84.88±17.72，DDP組和LC+DDP組非常顯著高于C

5、ontrol組(p＜0.01)，LC+DDP組非常顯著低于DDP組(p＜0.01)；血清BUN水平(mmol/L)：Control組、DDP組、LC+DDP組分別為6.83±0.70、40.53+7.94、14.35±4.07，DDP組和LC+DDP組非常顯著高于Control組(p＜0.01)，LC+DDP組非常顯著低于DDP組(p＜0.01)。 2.大鼠腎組織脂質(zhì)過(guò)氧化測(cè)定：腎組織勻漿MDA水平(nmol/mgprot.)：

6、Control組、DDP組、LC+DDP組分別為2.61±0.36、5.44±0.84、4.16±0.62，DDP組和LC+DDP組非常顯著高于Control組(p＜0.01)，LC+DDP組非常顯著低于DDP組(p＜0.01)；腎組織勻漿GSH水平(mg/gprot.)：Control組、DDP組、LC+DDP組分別為62.17±7.67、35.74±7.02、46.70±8.13，DDP組和LC+DDP組非常顯著低于Control組

7、(p＜0.01)，LC+DDP組顯著高于DDP組(p＜0.05)。 3.大鼠腎組織病理結(jié)構(gòu)變化：光鏡下觀察，Control組腎小球、腎小管結(jié)構(gòu)清楚、正常；DDP組腎小球結(jié)構(gòu)尚且完整，腎近曲小管上皮細(xì)胞有空泡變性，壞死，管腔可見脫落上皮細(xì)胞，腎小管出現(xiàn)蛋白管型；LC+DDP組空泡變性、壞死明顯減少，細(xì)胞排列較紊亂，腎小球和腎小管結(jié)構(gòu)基本完整。 4.大鼠腎組織超微結(jié)構(gòu)變化：透射電鏡下觀察，Control組大鼠腎近曲小管上皮細(xì)

8、胞內(nèi)含有大量線粒體，形態(tài)規(guī)則，嵴數(shù)量較多，結(jié)構(gòu)完好。腎小球結(jié)構(gòu)正常；DDP組腎近曲小管上皮細(xì)胞線粒體高度腫脹呈圓泡樣，結(jié)構(gòu)模糊，嵴紊亂，斷裂缺失，部分呈空泡變性，部分崩解，細(xì)胞核結(jié)構(gòu)松散，核染色質(zhì)稀淡。腎小球足細(xì)胞突起較腫脹，部分融合，核染色質(zhì)也較稀淡，與胞漿邊界模糊，核膜尚完整，基底膜略有增厚；LC+DDP組大鼠腎近曲小管上皮細(xì)胞內(nèi)線粒體嵴膜結(jié)構(gòu)稍顯模糊，但嵴斷裂缺失及線粒體空泡變性不如DDP組明顯。腎小球足細(xì)胞，基底膜結(jié)構(gòu)基本正常。

9、 5.大鼠腎組織原位細(xì)胞凋亡：Control組可見少數(shù)凋亡細(xì)胞；DDP組有較多凋亡細(xì)胞，且多集中于腎近曲小管部位；LC+DDP組也可見一些凋亡細(xì)胞，但明顯少于DDP組。 6.大鼠腎組織細(xì)胞胞漿細(xì)胞色素C免疫組化結(jié)果：鏡下觀察，Control組胞漿細(xì)胞色素C呈弱陽(yáng)性；DDP組呈強(qiáng)陽(yáng)性，較集中于腎近曲小管；LC+DDP組呈陽(yáng)性，也集中于腎近曲小管。Bcl-2蛋白表達(dá)：Control組少有Bcl-2蛋白表達(dá)；DDP組部分細(xì)胞呈

10、陽(yáng)性表達(dá)；LC+DDP組Bcl-2蛋白呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，明顯強(qiáng)于DDP組，集中分布于腎近曲小管部位。 結(jié)論： 1.LC可明顯減輕DDP對(duì)大鼠腎功能和腎組織結(jié)構(gòu)的損害，提示預(yù)防性給予LC對(duì)順鉑損傷大鼠的腎毒性具有一定的防護(hù)作用。 2.腎組織勻漿MDA和GSH含量測(cè)定表明，LC能明顯提高大鼠的抗氧化能力，有助于減輕DDP對(duì)腎臟的過(guò)氧化損害，此作用可能是LC對(duì)DDP腎毒性損害防護(hù)作用的主要機(jī)制之一。 3.LC對(duì)DD