乙酰化左旋肉堿對大鼠缺血性腦損傷的神經(jīng)保護作用.pdf

1、目的:缺血性腦血管疾病是嚴重危害人類健康的常見病和多發(fā)病,其發(fā)病率和死亡率在國內(nèi)外均居前位。目前對其發(fā)病機制及治療措施的研究一直是人們關(guān)注的熱點。乙?；笮鈮A由左旋肉堿經(jīng)肉毒堿乙酰轉(zhuǎn)移酶催化生成,可作為乙酰膽堿和L-谷氨酸的來源,促進細胞能量合成。文獻報道,乙?；笮鈮A具有顯著的神經(jīng)保護作用,可用于缺血性腦損傷和神經(jīng)退行性疾病的治療,但其確切機制尚不清楚。本文主要觀察乙?；笮鈮A(ALC)對大鼠缺血性腦損傷的保護作用,并探討其可能

2、的機制。
　　 方法:
　　 1：觀察ALC對局灶性大鼠腦缺血的保護作用:采用改良的線栓大鼠大腦中動脈的方法制作大鼠缺血模型,計算腦梗死體積百分比,觀察ALC對此模型的腦缺血保護作用。
　　 2：細胞培養(yǎng):PC12細胞培養(yǎng)于含DMEM完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶,置于37℃,5％CO2,95％空氣飽和濕度的CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
　　 3：PC12細胞缺血缺氧損傷模型的建立與實驗分組:PC12細胞以1.0×108L-

3、1的密度接種,培養(yǎng)24 h后加入含糖0.5 mg/mL、含Na2S2O43mmol·L-1的DMEM溶液繼續(xù)培養(yǎng)3 h。實驗分為3組:正常組、模型組(缺血缺氧組)即:用連二亞硫酸鈉(Na2S2O4)合并低糖培養(yǎng)基建立體外細胞缺血缺氧損傷模型、ALC組(ALC預(yù)處理24 h后,用Na2S2O4合并低糖培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)3 h)。
　　 4：MTT法檢測ALC預(yù)作用24 h后細胞活力的改變:96孔板中的各組細胞每孔加入MTT(5 mg/

4、mL)100μL,37℃孵育4 h,每孔各加DMSO200μL,然后在酶標儀上于570 nm波長處測吸光度(OD值)。
　　 5：TUNEL染色法:缺血缺氧損傷的PC12細胞凋亡細胞百分比用凋亡細胞數(shù)占總細胞數(shù)比值求得。
　　 6：用酶化學法測定ALC預(yù)作用24 h后低糖低氧誘導的PC12細胞丙二醛(MDA)的變化:觀察ALC對缺血缺氧損傷的PC12細胞的保護作用。
　　 7：超氧化物歧化酶SOD活性檢測:按試劑

5、盒說明書要求測定各組細胞SOD活力。
　　 結(jié)果:
　　 1：ALC能明顯降低局灶性腦缺血大鼠的腦梗死體積百分比。
　　 腦組織切片染色結(jié)果表明,大鼠大腦中動脈缺血模型后6 h,模型組的大鼠患側(cè)半球大腦中動脈供血區(qū)軟化、蒼白。ALC組的患側(cè)半球軟化、蒼白區(qū)縮小。線栓法致大鼠局灶性腦缺血模型組腦組織腦梗死體積百分比明顯高于假手術(shù)組(O),ALC組腦梗死體積百分比為14.02％±2.03％,與模型組23.53％±2.

6、56％比較,差異有明顯統(tǒng)計學意義(P＜0.01,n=6),表明ALC能明顯降低缺血大鼠的腦梗死體積百分比。
　　 2：低糖可導致細胞損傷,程度隨糖濃度降低而加重。
　　 與正常組細胞相比,合并Na2S2O4基質(zhì)低糖的模型組細胞發(fā)生低糖、低氧。模型組細胞活力下降,細胞存活率降低,表現(xiàn)為吸光度明顯下降。
　　 3：ALC對缺血缺氧所致的PC12細胞損傷具有保護作用。
　　 MTT結(jié)果顯示,不同濃度ALC對正常

7、組和模型組細胞活性的影響不同。低于800μmol·L-1的ALC對正常PC12細胞的活性無明顯影響,800μmol·L-1～20 mmol·L-1的ALC降低正常組細胞活性,表現(xiàn)為OD值下降。而100～600μmol·L-1 ALC預(yù)作用24 h后可以不同程度提高模型組細胞細胞活力。
　　 4：ALC抑制缺血缺氧所致的細胞凋亡。
　　 TUNEL染色結(jié)果表明,模型組凋亡細胞數(shù)明顯高于正常組,ALC預(yù)作用24 h后凋亡細胞

8、數(shù)明顯下降。模型組凋亡細胞所占正常細胞的百分率為10.22％±2.84％,與正常組0.91％±0.28％相比,具有明顯統(tǒng)計學意義(P＜0.01,n=4)。200μmol·L-1的ALC預(yù)作用24 h后能明顯減少凋亡細胞百分率至0.95％±0.57％(P＜0.01,n=4)。
　　 5：ALC降低缺血缺氧損傷PC12細胞的MDA含量。
　　 缺血缺氧損傷的PC12細胞勻漿MDA活性為1.04±0.20 nmol/mgpro

9、tein,與對照組0.49±0.10 nmol/mg protein相比明顯升高(P＜0.05,n=6)。200μmol·L-1的ALC可明顯降低細胞勻漿中升高的MDA含量(0.16±0.03 nmol/mg protein),與模型組相比具有明顯統(tǒng)計學意義(P＜0.01,n=6)。
　　 6：ALC增強缺血缺氧損傷PC12細胞的SOD活性。
　　 模型組細胞SOD活性為7.17±1.14 U/mg protein,與正

10、常組10.13±0.03 U/mg protein相比明顯下降(P＜0.05,n=6)。200μmol·L-1的ALC可明顯升高缺血缺氧損傷PC12細胞的SOD活性(17.26±2.84 U/mgprotein),與模型組相比具有明顯統(tǒng)計學意義(P＜0.01,n=6),表明ALC可增強缺血缺氧損傷PC12細胞的SOD活性。
　　 結(jié)論:
　　 ALC能明顯減輕大鼠大腦中動脈缺血模型腦損傷,對缺血缺氧所致的PC12細胞損傷