黃芩苷對(duì)缺血性腦損傷的保護(hù)作用及作用機(jī)理研究.pdf

1、缺血性腦血管疾病(ICVD)嚴(yán)重危害人類健康，具有高發(fā)病率、高復(fù)發(fā)率和高致殘率的特點(diǎn)。因其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及興奮性氨基酸損傷、氧自由基學(xué)說(shuō)、炎癥反應(yīng)以及細(xì)胞凋亡等多個(gè)方面，一直是各國(guó)研究的難點(diǎn)。現(xiàn)在臨床應(yīng)用的藥物因存在顱內(nèi)出血、腦水腫等問(wèn)題，療效并不理想。因此，深入研究該病的發(fā)病機(jī)理、發(fā)現(xiàn)新的作用靶點(diǎn)以及尋找安全有效的治療藥物將會(huì)對(duì)缺血性腦血管疾病的防治產(chǎn)生重大意義。 近期研究表明，AngⅡ參與缺血性腦損傷的發(fā)生發(fā)展，但其具體作

2、用還未明確。炎癥在介導(dǎo)缺血再灌后繼發(fā)性損傷方面起著關(guān)鍵作用。黃芩苷是中藥黃芩根部的主要活性成分，臨床已用于抗菌、消炎和抗感染治療。研究發(fā)現(xiàn)，黃芩苷對(duì)腦缺血再灌注損傷有保護(hù)作用。 本實(shí)驗(yàn)采用線栓法建立大鼠腦缺血再灌注損傷模型，單次尾靜脈注射給予黃芩苷。通過(guò)行為學(xué)、病理生理學(xué)以及分子生物學(xué)的方法論證黃芩苷對(duì)缺血性腦損傷的保護(hù)作用，探討其作用機(jī)制，為缺血再灌注損傷的防治提供新思路。 1. 黃芩苷對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷后腦梗死體

3、積的影響ITC染色測(cè)定腦梗死體積。結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠可見(jiàn)大面積腦梗死(p<0.01)。與模型組比較，尼莫地平0.4 mg·kg-1，黃芩苷50、100、200mg·kg-1均可顯著降低腦梗死體積。p值分別為P<0.01，p<0.05，p<0.01，p<0.01。與尼莫地平組比較，黃芩苷200 mg·kg-1顯著降低腦梗死體積(p<0.01)。 2. 黃芩苷對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分的影響結(jié)果顯示，與

4、假手術(shù)組比較，模型組大鼠出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能缺損體征(P<0.01)。與模型組比較，尼莫地平0.4 mg·kg-1，黃芩苷50、100 mg·kg-1神經(jīng)功能缺損體征改善不明顯。黃芩苷200 mg·kg-1可明顯改善神經(jīng)功能缺損體征(p<0.05)。 3. 黃芩苷對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠病理形態(tài)學(xué)的影響HE染色結(jié)果可見(jiàn)，假手術(shù)組神經(jīng)元細(xì)胞未見(jiàn)病理學(xué)損傷。模型組細(xì)胞出現(xiàn)明顯病理學(xué)損傷。尼莫地平0.4 mg·kg-1，黃芩苷50、100

5、、200 mg·kg-1均可減輕腦組織病理學(xué)損傷。 4. 黃芩苷對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦組織內(nèi)AngⅡ含量的影響將大鼠腦組織勻漿，取上清液，按照放免試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，模型～AngII含量降低(p<0.05)。尼莫地平0.4 mg·kg-1，黃芩苷100、200 mg·kg-1可使腦中AngII含量升高(p<0.05)。 5. 黃芩苷對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠NF-κB p65核轉(zhuǎn)位的影響免疫組化結(jié)果

6、顯示，假手術(shù)組可見(jiàn)皮層神經(jīng)元NF-κB p65胞漿表達(dá)，胞核表達(dá)陰性。與假手術(shù)組比較，模型組可見(jiàn)皮層神經(jīng)元NF-κB p65胞核表達(dá)陽(yáng)性(p<0.01)。與模型組比較，尼莫地平0.4 mg·kg-1，黃芩苷50、100、200 mg·kg-1可使胞核內(nèi)NF-κB p65表達(dá)強(qiáng)度明顯減弱(p<0.01)，與尼莫地平組相比，黃芩苷200mg·kg-1可明顯減弱NF-κB p65在胞核內(nèi)的表達(dá)(p<0.05)。 6. 黃芩苷對(duì)腦缺血再

7、灌注損傷大鼠NF-κBp65蛋白表達(dá)量的影響Western blotting結(jié)果顯示，假手術(shù)組NF-κBp65蛋白有一定的基礎(chǔ)表達(dá)。與假手術(shù)組比較，模型組表達(dá)量明顯升高(P<0.01)。與模型組比較，尼莫地平0.4mg·kg-1，黃芩苷50、100、200 mg·kg-1可顯著降低NF-κBp65蛋白的表達(dá)(p<0.01)。與尼莫地平組比較，黃芩苷200 mg·kg-1顯著降低蛋白表達(dá)量(p<0.05)。 7. 黃芩苷對(duì)腦缺血再

8、灌注損傷大鼠NF-κBp65 mRNA表達(dá)量的影響以β-actin為內(nèi)參，RT-PCR半定量檢測(cè)缺血側(cè)皮層NF-κBp65 mRNA表達(dá)。結(jié)果顯示，模型組NF-κBp65 mRNA較假手術(shù)組明顯升高，尼莫地平0.4 mg·kg-1，黃芩苷50、100、200 mg·kg-1可顯著降低NF-κBp65 mRNA表達(dá)量(p<0.01)。與尼莫地平組比較，與尼莫地平組比較，黃芩苷200 mg·kg-1可顯著降低NF-κBp65mRNA表達(dá)量(