藏紅花素對(duì)順鉑致小鼠急性肝、腎損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的探討藏紅花素對(duì)順鉑致小鼠急性肝、腎損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　方法
　　30只雄性昆明小鼠隨機(jī)分為5組（每組6只），即空白對(duì)照組（生理鹽水0.2ml/d）、順鉑模型組(10 mg/kg)、低濃度藏紅花素組(6.25 mg/kg·d)、高濃度藏紅花素組(12.5mg/kg·d)及陽(yáng)性對(duì)照組（水飛薊素100 mg/kg·d）。除空白對(duì)照組外，其余各組均于實(shí)驗(yàn)第1天給予順鉑（10 mg/kg腹腔注射，單劑1次），藏紅花素給藥

2、組小鼠分別于實(shí)驗(yàn)每日腹腔注射不同劑量藏紅花素(6.25mg/kg，12.5mg/kg)1次。陽(yáng)性對(duì)照組小鼠分別于實(shí)驗(yàn)每日口服水飛薊素(100mg/kg)1次。實(shí)驗(yàn)第7天斷頭處死所有動(dòng)物。肝臟、腎臟組織切片HE染色觀察肝臟病理組織學(xué)改變;常規(guī)分離血清后全自動(dòng)生化儀檢測(cè)小鼠血清肝功能指標(biāo)(ALT、AST)及腎功能指標(biāo)(BUN、Cr);肝臟、腎臟組織勻漿檢測(cè)氧化應(yīng)激指標(biāo)丙二醛(MDA)及還原型谷胱甘肽(GSH)的含量，以及抗氧化酶指標(biāo)超氧化物

3、歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-px)以及過(guò)氧化氫酶(CAT)的活性;免疫組化方法及Western blot分析定性及定量檢測(cè)肝、腎勻漿中p-p38MAPK，p53，and caspase-3的表達(dá)差異。
　　結(jié)果
　　1.藏紅花素對(duì)順鉑損傷小鼠肝、腎功能的影響
　　空白對(duì)照組、順鉑模型組、低濃度藏紅花素組、高濃度藏紅花素組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠血清ALT分別為(37.33±4.89)，(138.83±11.2

4、5)，(76.83±6.49)，(71.33±8.66),(72.83±5.23) U/L。 AST分別為(64.50±6.38),(242.00±14.94),(132.50±9.54),(126.67±11.69),(124.02±8.49) U/L。 BUN分別為(20.94±1.92),(62.60±5.64),(32.41±2.97),(30.95±2.90),(32.83±3.11) mg/dl。 Cr別為(0.49±0.1

5、0),(2.12±0.22),(0.98±0.16),(0.94±0.22),(0.95±0.18) mg/dl。順鉑模型組小鼠的血清ALT、AST、BUN及Cr明顯高于空白對(duì)照組（p均＜0.05）。然而，與順鉑模型組比較，低、高濃度藏紅花素組小鼠血清ALT、AST、BUN及Cr水平均顯著降低（p均＜0.05）;低、高濃度藏紅花素組與陽(yáng)性對(duì)照組間無(wú)顯著性差異（p均＞0.05）。
　　2.藏紅花素對(duì)順鉑損傷小鼠肝、腎組織形態(tài)學(xué)的影響

6、
　　腹腔注射順鉑可導(dǎo)致肝臟形態(tài)組織學(xué)改變，包括小葉中心壞死，肝小葉結(jié)構(gòu)改變，以及肝細(xì)胞氣球樣變性。然而，藏紅花素給藥后上述肝組織損傷及壞死程度均可見明顯減輕。腹腔注射順鉑后，小鼠腎臟皮質(zhì)腎小管可見上皮細(xì)胞腫脹、空泡變性，管腔可見脫落上皮細(xì)胞，細(xì)胞排列紊亂，出現(xiàn)蛋白管型。而給予藏紅花素后，多數(shù)腎臟空泡變性、壞死明顯減少，細(xì)胞排列較順鉑組規(guī)整，腎小球和腎小管結(jié)構(gòu)基本完整，未見細(xì)胞壞死及管型。
　　3.藏紅花素對(duì)順鉑所致肝腎損傷

7、小鼠抗氧化系統(tǒng)的影響
　　空白對(duì)照組、順鉑模型組、低濃度藏紅花素組、高濃度藏紅花素組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠肝臟MDA含量分別為(2.48±0.37)，(5.82±0.72)，(3.47±0.39)，(3.14±0.38)，(3.39±0.38) nmol/mg protein; GSH分別為(5.28±0.34),(2.35±0.27),(3.45±0.29)，(3.69±0.36)，(3.39±0.27) mg/g protein。1

8、-5組小鼠腎臟MDA含量分別為(2.92±0.23),(6.87±0.37),(4.97±0.33),(4.64±0.32),(4.80±0.41)nmol/mgprotein; GSH分別為(5.77±0.40),(2.31±0.28),(3.66±0.30),(3.83±0.33)，(3.76±0.38) mg/g protein。順鉑模型組小鼠的肝腎組織中MDA含量顯著高于空白對(duì)照組（p均＜0.05)，而GSH含量顯著低于對(duì)照組（

9、p均＜0.05），但與順鉑模型組比較，低、高濃度藏紅花素組小鼠肝腎MDA含量均顯著降低（p均＜0.05）;低、高濃度藏紅花素組小鼠肝腎GSH含量均顯著升高（p均＜0.05）。低、高濃度藏紅花素組與陽(yáng)性對(duì)照組間MDA及GSH含量均無(wú)顯著性差異（p均＞0.05）。
　　4.藏紅花素對(duì)順鉑所致肝腎損傷小鼠抗氧化酶的影響
　　空白對(duì)照組、順鉑模型組、低濃度藏紅花素組、高濃度藏紅花素組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠肝臟SOD活性分別為(234.28

10、±19.7)，(118.66±13.93)，(171.48±16.25)，(177.50±15.21)，(174.97±11.85) U/mg protein; GSH-px活性分別為(317.83±21.68)，(171.33±21.95),(234.00±26.48),(241.33±25.22),(237.00±24.86) U/mgprotein; CAT活性分別為(35.53±3.65)，(16.16±2.46)，(21.53

11、±1.94)，(24.81±2.41)，(24.69±3.70) U/mg protein。腎臟SOD活性分別為(45.60±3.79)，(20.96±2.56),(32.14±2.47),(33.27±2.82),(32.87±4.55) U/mg protein; GSH-px活性分別為(274.79±15.01)，(163.06±11.45)，(220.27±16.28)，(213.89±25.08)，(212.05±24.68)

12、 U/mg protein; CAT活性分別為(21.57±2.55)，(9.97±1.90)，(14.17±1.78)，(15.08±1.67)，(14.73±1.53) U/mg protein。順鉑所致急性肝腎損傷的小鼠，肝腎組織內(nèi)上述酶活性與空白對(duì)照組小鼠相比，均明顯降低（p均＜0.05)。與順鉑模型組比較，低、高濃度藏紅花素組小鼠肝腎內(nèi)上述酶活性均顯著升高(p均＜0.05)。而低、高濃度藏紅花素組與陽(yáng)性對(duì)照組間上述各種酶活性無(wú)

13、顯著性差異(p均＞0.05）。
　　5.藏紅花素對(duì)順鉑肝腎損傷小鼠p-p38 MAPK、p53以及caspase3的影響
　　免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示p_p38MAPK、 p53定位于胞核，caspase3定位于胞漿，順鉑中毒小鼠肝腎p_p38MAPK、p53以及caspase3表達(dá)均增加，而低、高濃度藏紅花素可減少中毒小鼠肝腎p-p38MAPK、p53以及caspase3的表達(dá)。Western Blot檢測(cè)顯示空白對(duì)照組、順鉑

14、模型組、低濃度藏紅花素組、高濃度藏紅花素組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠肝臟中p-p38MAPK蛋白表達(dá):(0.05±0.03)，(0.41±0.06)，(0.21±0.04)，(0.21±0.04)，(0.22±0.04); p53蛋白表達(dá):(0.06±0.02)，(0.73±0.06)，(0.49±0.06)，(0.50±0.07)，(0.47±0.06); caspase3蛋白表達(dá):(0.08±0.04)，(0.83±0.05)，(0.50±0

15、.05)，(0.50±0.04)，(0.48±0.05)。小鼠腎臟中p-p38MAPK蛋白表達(dá):(0.04±0.02),(0.45±0.04),(0.22±0.05),(0.21±0.04),(0.22±0.04); p53蛋白表達(dá):(0.05±0.02),(0.68±0.08),(0.49±0.06),(0.51±0.08),(0.46±0.05);caspase3蛋白表達(dá):(0.09±0.04)，(0.54±0.06)，(0.36±

16、0.04)，(0.33±0.04)，(0.31±0.03)。順鉑所致肝腎臟損傷的小鼠，肝腎組織中p-p38MAPK、p53及caspase3的表達(dá)明顯高于空白對(duì)照組小鼠（p均＜0.05）。而與順鉑模型組相比，低、高濃度藏紅花素組小鼠肝腎組織中p-p38MAPK、p53及caspase3的表達(dá)表達(dá)均顯著降低（p均＜0.05）。而低、高濃度藏紅花素組與陽(yáng)性對(duì)照組間無(wú)顯著性差異（p均＞0.05）。
　　結(jié)論
　　1.藏紅花素(6.

17、25mg/kg.d、12.5mg/kg.d)可明顯降低順鉑致急性肝、腎損傷小鼠的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性以及尿素氮、肌酐的水平，對(duì)順鉑引起的小鼠急性肝腎毒性具有良好的保護(hù)作用。
　　2.藏紅花素(6.25mg/kg.d、12.5mg/kg.d)可明顯改善順鉑所致肝腎組織結(jié)構(gòu)的改變，提示藏紅花素對(duì)順鉑所致小鼠的肝腎組織損傷具有一定的保護(hù)作用。
　　3.藏紅花素(6.25mg/kg.d、12.5mg/kg.d)可通過(guò)減少M(fèi)