食管滴酸刺激誘導(dǎo)內(nèi)臟致敏大鼠島葉基因譜改變的研究.pdf

1、目的：通過(guò)腹腔卵清蛋白注射制備內(nèi)臟高敏感大鼠動(dòng)物模型，給予持續(xù)食管內(nèi)滴酸，應(yīng)用基因芯片技術(shù)觀察酸刺激模式下致敏大鼠島葉中基因譜的改變，試圖發(fā)現(xiàn)島葉中可能與食管感覺(jué)相關(guān)的分子生物學(xué)基礎(chǔ)，并為深入探討島葉中變化的基因譜及其物質(zhì)在食管感覺(jué)中的作用以及進(jìn)一步研究感覺(jué)中樞島葉在食管內(nèi)臟感覺(jué)中的作用提供重要的基礎(chǔ)。
　　 方法：將雄性SD大鼠23只隨機(jī)分為4組，A組(實(shí)驗(yàn)組，n=8)：在實(shí)驗(yàn)第0天以O(shè)VA100 mg，輔以氫氧化鋁佐劑200

2、 mg的混合液1.5 ml行腹腔注射致敏；B組(致敏對(duì)照組，n=6)：在實(shí)驗(yàn)第0天以O(shè)VA100 mg，輔以氫氧化鋁佐劑200 mg的混合液1.5 ml行腹腔注射致敏；C組(滴酸對(duì)照組，n=6)：正常飼養(yǎng)，不予以任何處理；D組(空白對(duì)照組，n=3)：正常飼養(yǎng)，不予以任何處理。實(shí)驗(yàn)第14天，對(duì)A、C兩組動(dòng)物分別進(jìn)行食管酸灌注，使用0.1 mol/L鹽酸滴注，滴注液保持37℃，速度10ml/h，共50min，B、D兩組不予食管刺激。根據(jù)大鼠

3、腦立體定位圖譜，通過(guò)腦定位儀定位島葉并取材送檢，通過(guò)TotalRNA抽提試劑盒抽提總RNA。使用“Nucleo Trap mRNA Midi Purification Kits”純化mRNA。采用Affymetrix Rat Genome2302.0 Array基因芯片進(jìn)行寡核苷酸芯片雜交。配合GCOS數(shù)據(jù)分析軟件得出數(shù)據(jù)，分別進(jìn)行基因差異分析(Dif)，基因表達(dá)差異趨勢(shì)分析(STC)，基于顯著性基因表達(dá)趨勢(shì)的Gene Ontology

4、分析(STC-GO)，研究動(dòng)態(tài)基因作用網(wǎng)絡(luò)(Dyamic GeneNet)等芯片差異基因數(shù)據(jù)分析。
　　 結(jié)果：在食管滴酸灌注致敏SD大鼠后，在31,099個(gè)待測(cè)基因中，四組間顯著差異表達(dá)基因共662條，占全部基因的2.13％，其中已知功能基因301條，未知功能基因361條，其中關(guān)鍵基因有51條(有上調(diào)的關(guān)鍵基因31條，有下調(diào)的關(guān)鍵基因20條)，占四組間差異基因的7.70％，這些基因主要涉及到金屬離子結(jié)合、陽(yáng)離子結(jié)合、膜組成部分

5、、細(xì)胞過(guò)程調(diào)控、生物過(guò)程調(diào)控、生物過(guò)程、分子功能、細(xì)胞元件等。關(guān)鍵基因中包含了與抑制性神經(jīng)遞質(zhì)GABA相關(guān)的重要基因GAD2、SLC6A11和TRAK2。
　　 結(jié)論：食管滴酸灌注條件下OVA致敏大鼠島葉中存在有基因的差異表達(dá)，GAD2、SLC6A11基因的上調(diào)及TRAK2基因的下調(diào)可能在調(diào)控食管內(nèi)臟感覺(jué)中發(fā)揮著重要的作用，可能通過(guò)抑制性神經(jīng)遞質(zhì)GABA而發(fā)揮作用，其作用方式可能為三者相互關(guān)聯(lián)，相互協(xié)調(diào)。島葉中的GAD2、SLC