基因組CpG島甲基化譜的改變與腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移的關(guān)系.pdf

1、南京醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文基因組CpG島甲基化譜的改變與腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移的關(guān)系姓名：顧玉梅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：孫玉潔20080510南京醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文基因組CpG島甲基化譜的改變與腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移的關(guān)系中文摘要為了從基因組整體水平評(píng)價(jià)CpG島甲基化的改變?cè)谀[瘤發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移中的作用，尋找癌組織特異性及轉(zhuǎn)移特異性的甲基化譜標(biāo)志物，本研究首次聯(lián)合運(yùn)用甲基化敏感的限制性指紋技術(shù)(MSRF)和變性高效液相色譜(

2、DHPLC)檢測(cè)法，以乳腺癌和結(jié)直腸癌作為代表，分別比較分析了31例乳腺癌與癌旁組織、15例結(jié)直腸癌與癌旁組織以及15例具有相同病理類(lèi)型和分化程度，但不同轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的結(jié)直腸癌組織的基因組CpG島甲基化譜。我們首先利用對(duì)照細(xì)胞系從36對(duì)隨機(jī)引物中篩選出10對(duì)特異性高、重復(fù)性好、符合本研究需要的MSRF引物，然后利用MSRFDHPLC，檢測(cè)上述組織標(biāo)本。我們發(fā)現(xiàn)利用58、67兩對(duì)隨機(jī)引物和18、67兩對(duì)隨機(jī)引物的組合，可以分別檢測(cè)出839％(

3、26／31)的乳腺癌組織和933％(14／15)的結(jié)直腸癌組織發(fā)生了特異性的甲基化譜改變，而且在兩種類(lèi)型的腫瘤標(biāo)本中，甲基化譜的改變均以高甲基化為主。另外，乳腺癌組織基因組甲基化譜的改變與患者的年齡、病理類(lèi)型、腫瘤大小、組織分級(jí)等臨床資料無(wú)關(guān)。不同轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的結(jié)直腸癌組織具有相似的甲基化譜，兩組不同轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的結(jié)直腸癌組織發(fā)生異常高甲基化的頻率在其中一對(duì)引物的檢測(cè)中有差別。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：(1)腫瘤基因組CpG島甲基化的改變以高甲基化為