空氣或純氧復(fù)蘇宮內(nèi)窒息新生大鼠血氣和大腦SOD水平的比較.pdf

1、新生兒窒息是常見臨床問題,也是導(dǎo)致新生兒早期死亡和遠期神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥的重要原因之一.正確的新生兒復(fù)蘇技術(shù)能有效降低窒息新生兒死亡率,減少神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥,對提高人口素質(zhì)具有重要意義.一直以來,人們普遍接受采用純氧作為新生兒復(fù)蘇氣源的做法,而事實上這種做法缺乏足夠的理論依據(jù).隨著對新生兒窒息后病理生理學(xué)改變,以及高濃度氧氣可能對新生兒產(chǎn)生不良后果的了解,新生兒復(fù)蘇氣源的選擇問題開始受到重視.盡管目前有關(guān)新生兒復(fù)蘇氣源選擇的問題仍然存在爭論,

2、但是保證復(fù)蘇氣源的有效性和安全性是此問題的關(guān)鍵. 上世紀80年代,歐美等發(fā)達國家學(xué)者開始對空氣作為新生兒復(fù)蘇氣源的有效性進行研究,此類研究大部分為動物實驗,以新生動物缺氧缺血性腦損傷為研究模型,比較空氣和純氧復(fù)蘇的效果.但是由于這些研究以生后數(shù)天健康穩(wěn)定的新生動物為對象,忽視新生動物白宮內(nèi)向?qū)m外過渡的環(huán)節(jié),故對此類動物模型進行復(fù)蘇不能很好地反映新生兒窒息復(fù)蘇的真實過程.此外,簡單地以動物缺氧缺血性腦損傷模型來替代新生兒窒息也不十分恰當(dāng).

3、為使有關(guān)新生兒復(fù)蘇氣源選擇問題的動物實驗內(nèi)容更接近人類新生兒窒息,有必要建立更為合理的動物模型. 氧自由基(reactive oxygen species,ROS)包括超氧陰離子、羥自由基、氫過氧化物及超氧氮化合物等.ROS由于電子不配對,具有高度生物活性,會對許多細胞成分如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)及DNA等造成損害.此外其還可通過多種機制觸發(fā)細胞凋亡.目前研究表明,機體組織在缺氧缺血后再灌注過程中,會產(chǎn)生一定數(shù)量ROS,從而進一步加重組織

4、細胞的損傷.所以在新生兒復(fù)蘇氣源選擇問題中,組織產(chǎn)生氧自由基的水平可以作為評價內(nèi)容之一.超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)是機體重要的ROS清除劑之一,其活性下降可作為評定氧自由基生成的指標(biāo),而且其含量變化還可以間接地反映組織氧自由基的數(shù)量,進而預(yù)測組織細胞可能受到氧自由基損傷的程度. 本次研究通過建立與人類窒息新生兒更為接近的宮內(nèi)窒息新生大鼠模型,比較采用空氣或者純氧復(fù)蘇后,新生大鼠復(fù)蘇后短期死

5、亡率以及復(fù)蘇后新生動物血氣變化和大腦SOD水平等方面的差異,為新生兒復(fù)蘇氣源的選擇提供一些實驗依據(jù). 方法: 第一部分:宮內(nèi)窒息新生大鼠模型的建立 建模前根據(jù)抽簽法隨機決定每只新生大鼠的分組,參照Loidl和Harald H的方法建立宮內(nèi)窒息新生大鼠模型.取孕齡21天清潔級SD大鼠8只,分別將其斷頭后,以下腹正中線切開腹部,迅速剖宮娩出對照組新生大鼠,結(jié)扎并離斷含有剩余胎鼠的子宮,將其置于37℃生理鹽水中水浴15

6、分鐘,然后再剖宮娩出窒息組新生大鼠.所有納入研究的新生大鼠體重要求在4.5-5.5克,雌雄不限.對照組新生大鼠12只,宮內(nèi)窒息組新生大鼠14只.觀察各組新生大鼠出生當(dāng)時的表現(xiàn),并在生后30秒內(nèi)斷頭取血,比較各組新生大鼠血氣結(jié)果. 第二部分:空氣或純氧復(fù)蘇宮內(nèi)窒息新生大鼠血氣及大腦SOD水平比較 建模前根據(jù)抽簽法隨機決定每只新生大鼠的分組,參照第一部分方法建立動物模型.取孕齡21天的清潔級SD大鼠7只,分別對其進行剖宮產(chǎn),

7、得到對照組新生大鼠24只,宮內(nèi)窒息后采用空氣復(fù)蘇組新生大鼠26只,采用純氧復(fù)蘇組新生大鼠27只.對照組新生大鼠剖宮產(chǎn)娩出后,迅速擦干其全身后置于己預(yù)熱至28-30℃的環(huán)境中.宮內(nèi)窒息新生大鼠剖宮產(chǎn)娩出后,迅速擦干其全身后分別置于已預(yù)熱至28-30℃的空氣或純氧環(huán)境中,通過刺激新生大鼠口周及腹部皮膚促其自主呼吸的方法進行復(fù)蘇,復(fù)蘇時間為30分鐘.如新生大鼠在復(fù)蘇時間結(jié)束后仍無自主呼吸,同時膚色灰白,對外界刺激無反應(yīng),即被認為死亡,不再進行

8、后續(xù)研究.我們首先判斷復(fù)蘇后0小時新生大鼠的存活情況,然后根據(jù)抽簽結(jié)果分別于復(fù)蘇后0小時,6小時,24小時斷頭處死存活新生大鼠,取血進行血氣分析,取大腦組織進行SOD水平檢測. 結(jié)果: 第一部分宮內(nèi)窒息新生大鼠模型的建立 1、各組新生大鼠出生當(dāng)時的表現(xiàn):宮內(nèi)窒息組新生動物剖宮產(chǎn)娩出后,85.7﹪(12/14)新生大鼠未立即出現(xiàn)自主呼吸,14.3﹪(2/14)出現(xiàn)微弱呼吸;所有新生大鼠膚色呈灰白色;對照組新生大鼠剖

9、宮產(chǎn)娩出后,100﹪(12/12)新生大鼠立即出現(xiàn)自主呼吸,膚色均呈粉紅色. 2、各組新生大鼠血氣的比較:宮內(nèi)窒息組新生大鼠血氣pH,PO<,2>,PCO<,2>,BE分別為6.70±0.11,39.7±5.2mmHg,90.4±10.6mmHg,-21.3±2.2mmol/L,對照組新生大鼠血氣pH,PO<,2>,PCO<,2>,BE分別為7.13±0.04,46.5±5.6mmHg,59.2±7.8 mmHg,-8.2±2.

10、9mmol/L,兩組比較,各指標(biāo)差異均有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01). 第二部分空氣或純氧復(fù)蘇宮內(nèi)窒息新生大鼠血氣和大腦SOD的比較 1、各組新生大鼠死亡率的比較:純氧復(fù)蘇組新生大鼠復(fù)蘇后死亡率為3.7﹪(1/27),空氣復(fù)蘇組新生大鼠復(fù)蘇后死亡率為0(0/26),對照組新生大鼠死亡率為0(0/24).各組比較,差異無顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05). 2、各組新生大鼠血氣的比較:純氧復(fù)蘇組新生大鼠復(fù)蘇后0小

11、時血PO<,2>明顯高于采用空氣復(fù)蘇組(69.2±8.2 mmHg vs 55.5±10.3mmHg).兩組比較,差異有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.004).純氧復(fù)蘇組新生大鼠復(fù)蘇后0小時血pH,PCO<,2>,BE分別為6.97±0.05,60.3±12.4mmHg,-17.7±2.0mmol/L,空氣復(fù)蘇組血pH,PCO<,2>,BE分別為6.99±0.10,60.4±12.8minHg,-17.0±2.5mmol/L.兩組比較,各差

12、異均無顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05):采用純氧復(fù)蘇組新生大鼠復(fù)蘇后6小時、24小時血pH,PO<,2>,PCO<,2>,BE與空氣復(fù)蘇組比較,各差異均無顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05). 3、各組新生大鼠大腦SOD水平的比較:純氧復(fù)蘇組新生大鼠復(fù)蘇后0小時,6小時大腦SOD水平分別為38.3±9.8U/mgprot,8.6±3.6U/mgprot,空氣復(fù)蘇組新生大鼠復(fù)蘇后0小時,6小時大腦SOD水平分別為53.8±10.6 U

13、/mgprot,13.0±4.6 U/mgprot.兩組比較,各差異均有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05).純氧復(fù)蘇組新生大鼠復(fù)蘇后24小時大腦SOD水平與空氣復(fù)蘇組比較,差異無顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05).空氣或純氧復(fù)蘇組新生大鼠復(fù)蘇后0小時,6小時,24小時大腦SOD水平均低于對照組(P<0.01). 結(jié)論: 1 本法建立的宮內(nèi)窒息模型效果可靠,且更類似于人類新生兒窒息的臨床表現(xiàn)及血氣特征. 2 采用空氣復(fù)