抗性淀粉為內(nèi)源標(biāo)記矯正的小腸區(qū)段碳水化合物吸收實(shí)驗(yàn)方法研究.pdf

1、據(jù)美國(guó)醫(yī)學(xué)學(xué)會(huì)報(bào)道，我國(guó)成人糖尿病患者數(shù)估計(jì)超一億，已成為糖尿病的人口大國(guó)，可能已經(jīng)達(dá)到“警戒級(jí)別”。成人糖尿病患病率近年來(lái)上升至11.6％，其中男性糖尿病患病率為12.1％，女性11％，城市、農(nóng)村居民分別為14.3％、10.3％，約70％患者不知自己患有此病[1]。日益嚴(yán)重的肥胖癥也正在影響著人類的健康。近年來(lái)，有調(diào)查顯示，人們對(duì)碳水化合物的日攝入量逐年攀升。糖尿病、肥胖癥等代謝相關(guān)疾病主要是由于打破了能量攝入和能量消耗二者平衡。碳水

2、化合物作為最主要的三大營(yíng)養(yǎng)素之一，為機(jī)體提供了大部分的能量來(lái)源。由于碳水化合物在小腸內(nèi)消化分解后的葡萄糖為甜味物質(zhì)，本課題組主要致力于對(duì)小腸甜味受體的研究。自腸道甜味受體的發(fā)現(xiàn)，人們對(duì)甜味受體的研究從口腔延伸至腸道，在小腸的內(nèi)分泌細(xì)胞上存在著甜味受體的表達(dá)，甜味物質(zhì)的刺激致使腸分泌細(xì)胞分泌腸促胰島素(GLP-1、GIP)調(diào)節(jié)腸道內(nèi)葡萄糖的吸收。為了探究小腸甜味受體、小腸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收以及飲食健康三者之間的關(guān)系，本課題組前期對(duì)小腸甜味

3、受體的表達(dá)已有深入研究，為此小腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收是本論文研究的重點(diǎn)。近年來(lái)對(duì)小腸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的研究方法有多種，最常用的主要是體內(nèi)法。體內(nèi)法中標(biāo)記物的選擇與測(cè)定是研究的關(guān)鍵。結(jié)合文獻(xiàn)資料及實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，與傳統(tǒng)的標(biāo)記物比較，抗性淀粉存在作為標(biāo)記物的可能性，因此本論文根據(jù)抗性淀粉的測(cè)定原理，通過對(duì)傳統(tǒng)測(cè)定方法的優(yōu)化，建立了抗性淀粉微量快速高通量的研究方法。利用此實(shí)驗(yàn)方法研究分析不同鼠種的小腸碳水化合物吸收及甜度對(duì)小腸碳水化合物吸收的影

4、響。研究得出的結(jié)果如下:
　　(1)抗性淀粉微量快速高通量分析檢測(cè)方法研究
　　在對(duì)樣品預(yù)溶、添加磁珠、酶解時(shí)間、乙醇清洗次數(shù)、無(wú)水乙醇清洗、KOH添加量、AMG酶解時(shí)間的優(yōu)化過程中，發(fā)現(xiàn)樣品預(yù)溶、添加磁珠、乙醇清洗次數(shù)、無(wú)水乙醇清洗、KOH添加量的優(yōu)化有較好效果，經(jīng)過優(yōu)化后的實(shí)驗(yàn)方法將試劑的使用量降低為10％;整個(gè)實(shí)驗(yàn)均在1.5mL的EP管中進(jìn)行，高效的實(shí)現(xiàn)了多個(gè)樣品的同時(shí)檢測(cè);對(duì)樣品的分樣預(yù)處理提高了樣品測(cè)定的準(zhǔn)確度;結(jié)

5、合GOPOD法，提升了樣品的檢測(cè)速度。
　　(2)小腸區(qū)段取樣方法的研究
　　本章探究的小腸區(qū)段取樣方法作為樣品制備的前提，為后續(xù)建立抗性淀粉為內(nèi)源標(biāo)記矯正的小腸區(qū)段碳水化合物吸收實(shí)驗(yàn)方法提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。以成年C57小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過測(cè)定胃的排空率以及小腸的推進(jìn)率，確定取樣時(shí)間;通過隨機(jī)取樣的方式，確定小腸區(qū)段的取樣位置點(diǎn)。結(jié)果顯示，進(jìn)食后0至55min左右小腸處于填充階段，300min左右十二指腸開始排空，取樣時(shí)間應(yīng)在5

6、5～300min。隨機(jī)取樣的結(jié)果顯示在十二指腸區(qū)段顯示濃度高峰，往后濃度降低，至回腸區(qū)段的濃度增高，為此，腸道均勻分段能更加全面的反映碳水化合物在小腸不同腸段的分布狀況。
　　(3)小腸區(qū)段抗性淀粉矯正方法的研究
　　在研究小腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的過程中，鑒于小腸內(nèi)食糜團(tuán)的堆積現(xiàn)象，需對(duì)所測(cè)得的碳水化合物進(jìn)行矯正。將標(biāo)記物濃度增加的倍數(shù)換算成小腸食糜體積增加的倍數(shù)，從而還原所測(cè)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在小腸內(nèi)的真實(shí)量。為驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方法的可行性

7、，選用成年公雞為研究對(duì)象，經(jīng)抗性淀粉矯正后的結(jié)果與前人以91Y為標(biāo)記物的結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)二者無(wú)顯著性差異，因此判斷抗性淀粉為內(nèi)源標(biāo)記矯正的實(shí)驗(yàn)方法是可行的。
　　(4)抗性淀粉為內(nèi)源標(biāo)記矯正的小腸區(qū)段碳水化合物吸收實(shí)驗(yàn)方法的應(yīng)用
　　通過對(duì)C57小鼠、SD大鼠、金黃地鼠及豚鼠的小腸區(qū)段碳水化合物的研究，證實(shí)了該實(shí)驗(yàn)方法在不同鼠種中的適用性，并發(fā)現(xiàn)能很好的區(qū)分出不同鼠種小腸對(duì)碳水化合物的吸收狀況。此外，采用該實(shí)驗(yàn)方法研究不同甜度的