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文檔簡介
1、本研究旨在通過實驗研究SBD(淀粉結合域)以及其串聯(lián)后的SBD(N)與淀粉親和性的變化。以黑曲霉的基因組為模板，用Pfu聚合酶對SBD基因編碼序列進行PCR擴增。并將SBD連接到pTrehisB表達載體中。然后采用同尾酶連接法得到pTrehisB/SBD(N)質粒載體。酶切pTrehisB/SBD(N)質粒中的SBD(N)片段并接入pET28b表達質粒中得到pET28b/SBD(N)后，將其表達質粒載體轉入到Rosseta宿主中，用IP
2、TG誘導重組蛋白質的表達，最后通過Ni+-NTA柱來純化蛋白。 以多種碳水化合物為底物，通過非變性親和電泳來定性分析SBD(N)重組蛋白否能與水溶性碳水化合物結合，通過SDS-PAGE來檢驗SBD(N)是否能與不溶性碳水化合物結合。最后通過等溫滴定量熱儀(ITC)來測定SBD1到SBD5與β-環(huán)糊精親和力的大小。 實驗結果說明：SBD(N)與水溶性淀粉、β-環(huán)糊精、不溶性淀粉都有強的作用力。隨著SBD1到SBD5串聯(lián)個數(shù)
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