腹主動(dòng)脈及下腔靜脈暫時(shí)性阻斷、阿霉素隔離循環(huán)灌注的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的：研究采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法，將腹主動(dòng)脈及下腔靜脈暫時(shí)性阻斷，在阻斷部位下方以轉(zhuǎn)流泵為動(dòng)力，形成下腔靜脈－轉(zhuǎn)流泵－腹主動(dòng)脈－組織－下腔靜脈的人工循環(huán)，建立大白鼠腹主動(dòng)脈及下腔靜脈暫時(shí)性阻斷隔離循環(huán)灌注動(dòng)物模型；探討灌注時(shí)間對(duì)鼠心率、呼吸，動(dòng)脈壓、血生化、肝腎臟功能、隔離灌注區(qū)肢體功能及健康狀況的影響；研究灌注下，ADM循環(huán)灌注的藥代動(dòng)力學(xué)特征；了解腹主動(dòng)脈及下腔靜脈暫時(shí)性阻斷、ADM隔離循環(huán)灌注化療對(duì)骨髓有核細(xì)胞凋亡、增殖的影響。

2、 第一部分：腹主動(dòng)脈及下腔靜脈暫時(shí)性阻斷、半身隔離循環(huán)灌注大鼠模型的建立 目的：建立大白鼠腹主動(dòng)脈及下腔靜脈暫時(shí)性阻斷隔離循環(huán)灌注動(dòng)物模型 方法：成年SD大白鼠分組：A組：腹主動(dòng)脈及下腔靜脈暫時(shí)性阻斷循環(huán)灌注30分鐘；B組：灌注60分鐘；C組：灌注90分鐘；D組：灌注120分鐘。在術(shù)前、術(shù)中、術(shù)后各時(shí)點(diǎn)進(jìn)行以下指標(biāo)檢測(cè)：1、呼吸、心率、動(dòng)脈壓的改變；2、灌注前后血生化及肝腎功能；3、灌注前后血?dú)猓?、灌注后肢體功能及

3、健康狀況。 結(jié)果：1．ABCD組腹主動(dòng)脈下腔靜脈阻斷后迅速出現(xiàn)頸動(dòng)脈血壓小幅上升，持續(xù)約3-5分鐘后逐漸降到阻斷前水平，并維持穩(wěn)定到阻斷灌注結(jié)束。D組阻斷灌注100分鐘后血壓出現(xiàn)小幅度下降。各組在阻斷后心率、呼吸一過性增快，但與灌注前相比無顯著性差異，并平穩(wěn)持續(xù)到阻斷灌注結(jié)束。2．C組灌注后PH及PO<,2>均降低，PC0<,2>升高；D組灌注后PH及P0<,2>均降低，PC0<,2>升高更明顯，與灌注前比差異有顯著性；AB組灌

4、注前后PH、PO<,2>、PC0<,2>均有差異，但差異無顯著性。3．ABCD組阻斷灌注前后大鼠血Na<'+>、K<'+>、Ca<'++>、Cl<'->均無顯著差異。4．手術(shù)后2周，AB組大鼠一般健康狀況恢復(fù)良好，D組大鼠一般健康情況恢復(fù)稍差。AB組大鼠麻醉清醒后行走自如，雙側(cè)后肢未見明顯跛行，C組清醒后3只大鼠行走困難，雙側(cè)后肢出現(xiàn)明顯跛行，3只不能行走雙側(cè)后肢不能活動(dòng)。D組清醒后6只大鼠均行走困難，6只大鼠后肢完全不能活動(dòng)，2周后大

5、鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)差。 第二部分：腹主動(dòng)脈及下腔靜脈暫時(shí)性阻斷、ADM隔離循環(huán)灌注大鼠的藥代動(dòng)力學(xué) 目的：研究腹主動(dòng)脈及下腔靜脈暫時(shí)性阻斷、ADM循環(huán)灌流的藥代動(dòng)力學(xué)改變。 方法：成年SD大白鼠隨機(jī)分AB組各9只，其余9只用于制備大鼠血清標(biāo)準(zhǔn)品。A組：腹主動(dòng)脈及下腔靜脈阻斷、建立隔離循環(huán)灌注模型，在阻斷部位之下，按45mg／m<'2>經(jīng)腹主動(dòng)脈注入ADM溶液，ADM后半身隔離循環(huán)灌注60分鐘。B組：同A，ADM隔

6、離循環(huán)灌注為前半身。兩組ADM給藥時(shí)間為5分鐘，分別在阻斷部位之上的腔靜脈及阻斷部位之下的股靜脈兩個(gè)部位于用藥后5、lO、20、30、40、50、60分鐘以及解除阻斷后5、lO、15分鐘各采血0.2ml，采用高效液相色譜分析檢測(cè)血漿中ADM濃度。 結(jié)果：1．A組給藥后5、lO、20、30、40、50、60分鐘，股靜脈血ADM濃度分別為(167.2±9.22)μg／ml、(156.1±7.21)μg／ml、(123.5±6.63)

7、μg／ml、(103.4±5.25)μg／ml、(100.3±5.67)μg／ml、(90.14±5.01)μg／ml、(87.41±6.57)μg／ml。阻斷部位以上腔靜脈血ADM濃度分別為0、0、(0.26±0.11)μg／ml、(0.48±0.23)μg／ml、(0.62±0.31)μg／ml、(0.93±0.27)μg／ml、(1.32±0.36)μg／ml；結(jié)束阻斷后5、lO、15分鐘股靜脈血ADM濃度分別為(19.52±4.

8、98)μg／ml、(3.54±1.32)μg／ml、(0.87±0.13 μg／ml；腔靜脈血ADM濃度分別為(19.41±5.01)μg／ml、(3.12±1.09)μg／ml、(1.02．±O.31)μg／ml。2．B組給藥后5、lO、20、30、40、50、60分鐘，阻斷部位以上下腔靜脈ADM濃度分別為(143.2.2±11.02)μg／ml、(122.1±9.63)μg／ml、(104.5±8.33)μg／ml、(92.41±6

9、.75)μg／ml、(84.14±7.67)μg／ml、(77.11±8.31)μg／ml、(54.69±7.66)μg／ml；阻斷部位以下股靜脈血ADM濃度分別為0、(2.21±0.57)μg／ml、(3.74±0.72)μg／ml、(4.16±1.17)μg／ml、(4.43±1.16)μg／ml、(4.68±1.65)μg／ml、(5.31±1.53)μg／ml；結(jié)束阻斷后5、10、15分鐘腔靜脈血ADM濃度分別為(16.65±3

10、.88)μg／ml、(9.25±4.32)μg／ml、(3.34±1.22)μg／ml；股靜脈血ADM濃度分別為(17.61±3.11)μg／ml、(7.43±2.66)μg／ml、(2.53±0.98)μg／ml。 第三部分：腹主動(dòng)脈及下腔靜脈暫時(shí)性阻斷、ADM隔離循環(huán)灌注對(duì)大鼠骨髓有核細(xì)胞凋亡、增殖的影響 目的：研究腹主動(dòng)脈及下腔靜脈暫時(shí)性阻斷、ADM隔離循環(huán)灌注化療方法對(duì)骨髓細(xì)胞凋亡、增殖的影響 方法：成年

11、SD大鼠，隨機(jī)分為ABC組各24只。A組：建立半身循環(huán)灌注模型后，ADM45mg／m<'2>于阻斷部位以下的下腔靜脈注入，維持隔離循環(huán)灌注60分鐘；B組：建立半身循環(huán)灌注模型后生理鹽水2ml于阻斷部位以下的下腔靜脈注入，維持隔離循環(huán)灌注60分鐘；C組：常規(guī)麻醉后，ADM45mg/m<'2>于尾靜脈注入。 觀測(cè)指標(biāo)：1．外周血白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血色素及血小板測(cè)定：各組動(dòng)物分別于術(shù)前及術(shù)后第3、7、11、15天從尾靜脈采血測(cè)定血白細(xì)胞

12、、紅細(xì)胞、血色素及血小板；2．形態(tài)學(xué)觀察：3．免疫組織化學(xué)：(1)細(xì)胞凋亡的檢測(cè)(2)增殖細(xì)胞核抗原檢測(cè)：4．骨髓細(xì)胞凋亡檢測(cè) 結(jié)果：1．外周血象：第3天，ABC各組實(shí)驗(yàn)前后外周血白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血色素及血小板無明顯變化；第7天時(shí)，AC組外周血白細(xì)胞、紅細(xì)胞及血色素明顯低于B組，尤以C組下降明顯。而血小板無明顯變化；第11天，A組白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血色素進(jìn)一步下降，明顯低于B組，C組下降更明顯，明顯低于AB組；第15天時(shí)A組紅細(xì)胞

13、、血色素開始明顯上升；C組外周血白細(xì)胞、紅細(xì)胞、及血色素也開始出現(xiàn)少量回升。2．骨髓形態(tài)學(xué)變化：第7天：A組股骨骨髓有核細(xì)胞明顯減少，可見散在灶狀增生活躍區(qū)域；肱骨骨髓細(xì)胞增生活躍，有核細(xì)胞明顯增多；C組股骨、肱骨骨髓有核細(xì)胞明顯減少，細(xì)胞增生均明顯減低；第11天，A組股骨骨髓有核細(xì)胞較7天時(shí)增多，可見大片增生活躍區(qū)域；肱骨骨髓細(xì)胞增生活躍，有核細(xì)胞明顯增多；C組股骨骨髓有核細(xì)胞較7天時(shí)稍增多，細(xì)胞出現(xiàn)增生；第15天，A組股骨骨髓有大量

14、有核細(xì)胞，增生活躍；C組股骨、肱骨骨髓有核細(xì)胞均明顯增多，增生活躍；3．免疫組化檢測(cè)：A組股骨有核細(xì)胞的Tunnel陽性率在第3天即升高，在第7天時(shí)達(dá)到高峰，明顯高于A組肱骨骨髓和C組股骨骨髓的凋亡細(xì)胞陽性率；c組股骨骨髓和肱骨骨髓的凋亡細(xì)胞陽性率相近，均明顯高于B組肱骨骨髓。第7天A組股骨骨髓和肱骨骨髓PCNA陽性細(xì)胞均明顯增多，分別為6.04％±0.22％和5.33％±0.32％，C組股骨骨髓和肱骨骨髓分別為2.54％±0.61％和

15、2.27％±0.28％，均明顯低于A組股骨骨髓和肱骨骨髓，A組股骨骨髓和肱骨骨髓第11天時(shí)PCNA陽性細(xì)胞率繼續(xù)增高，第15體時(shí)達(dá)到最高，分別為8.05％±1.11％和6.73％±1.05％；C組股骨骨髓和肱骨骨髓在第11天出現(xiàn)較多PCNA陽性細(xì)胞，在15天時(shí)上升到4.21％±0.57％和4.07％±0.47％。4．流式細(xì)胞儀檢測(cè)：A組股骨骨髓有核細(xì)胞凋亡陽性率在用藥后第3天出現(xiàn)明顯上升，第7天時(shí)達(dá)到31.11％±3.11％，A組肱骨骨

16、髓有核細(xì)胞中細(xì)胞凋亡陽性率在用藥后第3天為5.41％±0.53％，7天時(shí)為6.37％±1.42％，明顯低于A組股骨骨髓；B組股骨骨髓中壞死、凋亡細(xì)胞率為1.33％±0.22％，較B組肱骨骨髓高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；C組股骨骨髓和C組肱骨骨髓的壞死、凋亡細(xì)胞率在用藥后3天分別為15.55％±3.51％和16.54％±2.91％，7天時(shí)分別為22.64％±2.61％和23.21％±3.16％，明顯低于A組股骨，高于A組肱骨。 全文結(jié)論：

17、1．首次成功地建立了腹主動(dòng)脈及下腔靜脈暫時(shí)性阻斷、隔離循環(huán)灌注的大鼠模型，腹主動(dòng)脈及下腔靜脈暫時(shí)性阻斷、隔離循環(huán)灌注60分鐘是安全可行的。2．比較分析了大鼠腹主動(dòng)脈及下腔靜脈暫時(shí)性阻斷、ADM兩種給藥方式隔離循環(huán)灌注下的藥代動(dòng)力學(xué)特征：ADM前半身用藥以及ADM后半身用藥均可達(dá)到給藥區(qū)高血藥濃度，而非給藥區(qū)低濃度的效果，達(dá)到良好的隔離效果。3．腹主動(dòng)脈及下腔靜脈暫時(shí)性阻斷、ADM隔離循環(huán)灌注60分鐘可以對(duì)灌注區(qū)域骨髓有核細(xì)胞產(chǎn)生損傷作用