瘦素對脂變?nèi)烁渭?xì)胞TG的含量及PPARα、CPT-I、LPL表達的影響.pdf

1、目的：觀察瘦素對脂變肝細(xì)胞甘油三酯含量、脂滴形成和PPARα及其目標(biāo)基因CPT-I 、LPL mRNA表達的影響，初步探討瘦素對肝細(xì)胞脂質(zhì)變性的作用及其機制，為早期臨床防治NAFL提供理論基礎(chǔ)。 方法：以離體人肝L-02細(xì)胞株為研究對象。用含10％醫(yī)用脂肪乳注射液和10％胎牛血清的RPMI-1640的完全培養(yǎng)基孵育人肝L-02細(xì)胞24小時，制備肝細(xì)胞脂肪變性模型。實驗分為正常肝細(xì)胞組、模型組，即脂變肝細(xì)胞組、不同濃度瘦素組(使瘦

2、素終濃度分別為10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)、陽性對照組(即脂變肝細(xì)胞加入吉非羅齊，使其終濃度為100mg/L)；孵育24小時后，油紅O染色觀察細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞內(nèi)脂滴的形成情況，高效液相色譜法檢測細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的含量，半定量RT-PCR法檢測PPARα及其目標(biāo)基因CPT-I 、LPL mRNA 水平的表達。根據(jù)瘦素改善細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的含量情況，作出量效關(guān)系，然后以瘦素10-7mol/L濃度分別孵育模型組細(xì)胞1

3、2h，24h，48h，使用上述觀察方法，作出時效關(guān)系。實驗數(shù)據(jù)以±s表示，用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析，以P<0.05作為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果：用脂肪乳注射液孵育人肝L-02細(xì)胞24小時后，經(jīng)油紅O染色后倒置顯微鏡觀察，人肝L-02細(xì)胞漿內(nèi)見大量紅色的小泡性脂滴；高效液相色譜法檢測示細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量明顯增高，成功的制備肝細(xì)胞脂肪變性模型。加入瘦素(10-8mol/L，10-7mol/L，10-6mol/L)孵育2

4、4小時后，油紅O染色示胞漿內(nèi)脂滴與模型組比較明顯減低；高效液相色譜法結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量隨瘦素劑量的增高而降低；半定量RT-PCR法檢測各組細(xì)胞的PPARα及其目標(biāo)基因CPT-I 、LPL的mRNA水平，結(jié)果顯示：瘦素處理組較模型組相比，PPARα及其目標(biāo)基因的mRNA表達明顯上升，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。以瘦素(10-7mol/L)濃度為處理濃度，分別孵育模型組細(xì)胞12h，24h，48h后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：瘦素呈時間依賴性的降低