瘦素對肝細(xì)胞甘油三酯的含量及脂肪酸β氧化的影響.pdf

1、目的:觀察瘦素對脂質(zhì)變性人肝L-02細(xì)胞甘油三酯含量、脂肪酸β氧化及瘦素受體、肉堿轉(zhuǎn)移酶ImRNA表達(dá)的影響,探討肝細(xì)胞脂質(zhì)變性的發(fā)生機(jī)制及瘦素對其的防治作用。
　　方法:采用隨機(jī)對照研究,以離體人肝L-02細(xì)胞為研究對象。用10％(V/V)醫(yī)用脂肪乳注射液和10%(V/V)胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)基孵育人肝L-02細(xì)胞24小時,制備肝細(xì)胞脂肪變性模型。后分別加入重組人瘦素(10-5mol/l,10-6mol/l,10

2、-7mol/l)孵育24小時,油紅O染色觀察細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞內(nèi)脂滴的形成情況,高效液相色譜法檢測細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的含量,半定量RT-PCR法檢測瘦素受體和肉堿轉(zhuǎn)移酶I的mRNA表達(dá)。從而確定瘦素改善細(xì)胞脂肪變性的最佳濃度,作出量效關(guān)系。然后以瘦素最佳濃度分別孵育模型組細(xì)胞0h,12h,24h,48h,使用上述觀察方法,從而確定瘦素改善細(xì)胞脂肪變性的最佳時間,作出時效關(guān)系。實(shí)驗數(shù)據(jù)以x±s表示,用SPSS11.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,以P<

3、0.05作為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果:用脂肪乳注射液孵育人肝L-02細(xì)胞24小時后,油紅O染色符合肝細(xì)胞小泡性脂肪變性特征;HPLC測定細(xì)胞內(nèi)總甘油三酯含量明顯增高,與正常組比較有顯著性差異,成功的制備肝細(xì)胞脂肪變性模型。加入瘦素(10-5mol/l,10-6mol/l,10-7mol/l)孵育24小時后,油紅O染色胞漿內(nèi)脂滴與模型組比較明顯減低;HPLC結(jié)果發(fā)現(xiàn):細(xì)胞內(nèi)總甘油三酯含量隨瘦素劑量的增高而降低。以瘦素(10-6mo

4、l/l)濃度為最佳處理濃度,分別孵育模型組細(xì)胞0h,12h,24h,48h后,HPLC結(jié)果發(fā)現(xiàn):細(xì)胞內(nèi)總甘油三酯含量隨瘦素處理時間的延長呈時間依賴性降低。半定量RT-PCR法檢測各組細(xì)胞的CPT-1和OB-Rb的mRNA水平。結(jié)果顯示,瘦素處理組較正常組及模型組相比,CPT-1的mRNA表達(dá)明顯上升,有統(tǒng)計學(xué)意義。瘦素(10-5mol/l)處理組和模型組OB-Rb的mRNA表達(dá)較正常組明顯下降,有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:1.肝細(xì)胞