長(zhǎng)鏈游離脂肪酸對(duì)大鼠胰島的脂毒性和脂凋亡影響及瘦素的保護(hù)作用.pdf

1、該研究的目的是:1.研究長(zhǎng)鏈游離脂肪酸(LC-FFA)對(duì)體外培養(yǎng)大鼠胰島的影響;2.研究β細(xì)胞內(nèi)的甘油三酯(TG)與胰島脂毒性、脂凋亡指標(biāo)的關(guān)系;3.探討瘦素對(duì)胰島脂毒性、脂凋亡的干預(yù)作用.方法:1.取正常成年Sprague Dawley (SD)雄性大鼠的胰腺,經(jīng)過(guò)V型膠原酶消化,將胰島從胰腺中分離、純化出來(lái),顯微鏡下收集.在含15﹪胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)基中進(jìn)行原代培養(yǎng),葡萄糖濃度大約為8.0-9.0mmol/L,經(jīng)過(guò)

2、胰島功能測(cè)試后,證明該分離胰島具有活性,可進(jìn)行實(shí)驗(yàn).2.調(diào)整胰島懸液濃度,均勻接種在24孔培養(yǎng)板,每孔大約50個(gè)胰島,在37℃5﹪CO<,2>孵箱中培養(yǎng)6日.在種板當(dāng)時(shí)各孔加入相應(yīng)的各組培養(yǎng)液.按每3孔為1組.3.在培養(yǎng)的第2、4日取培養(yǎng)液上清,保存于-20℃,留待檢測(cè)Ins與NO,同時(shí)更換相應(yīng)各組培養(yǎng)液;在培養(yǎng)的第4、6日,將胰島用磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗3次,-80℃凍存,留待提取DNA和測(cè)定胞內(nèi)TG.結(jié)論:前提:該實(shí)驗(yàn)在這種具體