COX-2對脂變BRL-3A細胞TG代謝及PPAR-γ、CPT-1基因表達的影響.pdf

1、目的：
　　研究COX-2沉默與過表達對BRL-3A脂變及脂代謝相關基因PPAR-γ、CPT-1表達的影響。
　　方法：
　　1、篩選最佳醫(yī)用脂肪乳濃度，制備肝細胞脂變模型：不同濃度脂肪乳(1％、2%、4%、6%、8%、10%)培養(yǎng)BRL-3A24h后通過油紅蘇木素染色法觀察細胞形態(tài)與細胞內(nèi)脂滴的形成情況、采用ELISA檢測細胞內(nèi)TG含量、MTT檢測細胞增殖活性確定誘導細胞脂變的最佳脂肪乳濃度。
　　2、實驗分為

2、正常BRL-3A組、脂變BRL-3A對照組、pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2 shRNA組、pYr-1.1-hU6-EGFP-HK組、pcDNA3.1(+)-rCOX-2組、pcDNA3.1(+)-HK組、尼美舒利200ug/ml陽性對照組；除正常BRL-3A組外，其他各組均以6%脂肪乳溶液誘導24h，各轉染組分別利用lipofectamineTM2000將對應的質粒轉染入各組細胞，轉染24h后ELISA檢測各組細胞內(nèi)TG含

3、量,了解COX-2沉默或過表達對BRL-3A細胞內(nèi)TG水平的影響；RT-PCR檢測各組細胞COX-2及脂代謝相關基因PPAR-γ、CPT-1 mRNA的表達。
　　結果：
　　1、隨脂肪乳濃度增加，油紅蘇木素染色顯示BRL-3A內(nèi)紅色小泡性脂滴增多，ELISA檢測顯示TG含量增加，MTT檢測顯示OD值下降。6%脂肪乳溶液誘導后BRL-3A內(nèi)T G含量較正常肝細胞組明顯增加，且細胞存活率大于90%，故將6%確定為實驗誘導BRL

4、-3A脂變的最佳脂肪乳濃度。
　　2、轉染后，ELISA檢測各組細胞內(nèi)TG含量，RT-PCR檢測各組COX-2、PPAR-γ、CPT-1 mRNA的表達：
　　(1)與正常BRL-3A組相比，脂變BRL-3A對照組細胞內(nèi)TG含量明顯增加， COX-2 mRNA表達增加，PPAR-γ、CPT-1 mRNA表達減少；
　　(2)與脂變BRL-3A對照組相比，pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2 shRNA組和尼美舒

5、利200ug/ml陽性對照組細胞內(nèi)TG含量均減少，COX-2 mRNA表達均減少， PPAR-γ、CPT-1 mRNA表達均增加，以前者較為明顯；
　　(3)與脂變BRL-3A對照組相比，pcDNA3.1(+)-rCOX-2組細胞內(nèi)TG含量增加，COX-2 mRNA表達增加，PPAR-γ、 CPT-1 mRNA表達減少；
　　(4)pYr-1.1-hU6-EGFP-HK組、pcDNA3.1(+)-HK組與脂變BRL-3A對照

6、組比較均無統(tǒng)計學意義。
　　結論：
　　1、6%脂肪乳溶液誘導BRL-3A可成功建立體外肝細胞脂肪變性模型。
　　2、BRL-3A脂變后，細胞內(nèi)TG含量增加，COX-2表達升高，脂代謝相關基因PPAR-γ、CPT-1表達降低。
　　3、COX-2沉默或抑制后，BRL-3A細胞COX-2表達降低，PPAR-γ、CPT-1表達升高，細胞內(nèi)TG含量減少。
　　4、COX-2過表達后，BRL-3A細胞 COX-2表