原發(fā)性肝癌外周血MDSCs和吉西他濱誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞自噬的研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌是世界第三腫瘤致死性疾病，也是中國(guó)的難治性腫瘤之一，其90％以上是原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)。
　　在原發(fā)性肝癌的發(fā)生，發(fā)展和治療過(guò)程中均與免疫有關(guān)，可能與免疫有關(guān)的檢測(cè)物是一個(gè)有效的腫瘤標(biāo)志物;原發(fā)性肝癌的化療有效率不盡人意，細(xì)胞自噬與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、治療密切相關(guān)，亦在近年腫瘤研究中備受關(guān)注。
　　針對(duì)HCC上述2個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題，開展了原發(fā)性肝癌“外周血MDSCs的

2、研究”和“吉西他濱誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞自噬的研究”。其特色是外周血的檢測(cè)物具有無(wú)創(chuàng)，易多次取材，可動(dòng)態(tài)觀察，研究的MDSCs與腫瘤免疫逃逸有關(guān);吉西他濱對(duì)HCC的的自噬機(jī)制研究鮮見報(bào)道。
　　第一部分原發(fā)性肝癌外周血MDSCs的研究
　　目的:
　　在已有的研究中發(fā)現(xiàn)髓系衍生抑制細(xì)胞(MDSCs)在荷瘤小鼠和癌癥患者中比例明顯升高。本研究對(duì)肝細(xì)胞癌(HCC)患者外周血中MDSCs（標(biāo)記為L(zhǎng)in-/lowCD33+

3、 HLA-DR-）的行為進(jìn)行探索，進(jìn)一步明確其臨床意義，同時(shí)也對(duì)MDSCs的免疫調(diào)控通路進(jìn)行相關(guān)研究。
　　方法:
　　采集外周血，肝細(xì)胞肝癌組(n=63)和健康志愿者組(n=56)，測(cè)定MDSCs在外周血單核細(xì)胞中所占比例。同時(shí)測(cè)定了外周血中IFN-γ、VEGF、COX-2、MMP-13、NOS-2、ARG-1的表達(dá)。MDSCs對(duì)T細(xì)胞的抑制作用則通過(guò)CFSE進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果:
　　未經(jīng)治療的肝細(xì)胞肝癌患者

4、MDSCs的比例與腫瘤分期相關(guān)，分期越晚MDSCs所占比例越高(P=0.0004)。脾腫大患者外周血中MDSCs含量更高。其他相關(guān)的臨床特征，如肝硬化、肝炎病毒感染等均未明顯影響MDSCs的比例。外周血中COX-2，MMP-13和VEGF表達(dá)與MDSCs的變化相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　研究表明肝細(xì)胞肝癌患者外周血中標(biāo)記為L(zhǎng)in-/lowCD33+ HLA-DR-的 MDSCs明顯升高。并且MMP-13和COX-2表達(dá)可能與肝細(xì)

5、胞肝癌患者M(jìn)DSCs的行為有關(guān)，影響肝細(xì)胞肝癌的發(fā)生發(fā)展。
　　第二部分吉西他濱誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞自噬的研究
　　目的:
　　研究吉西他濱作用肝細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞自噬及分子機(jī)制。
　　方法:
　　通過(guò)檢測(cè)HepG2細(xì)胞在吉西他濱作用后微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(MAP1-LC3)的變化，透射電鏡(TEM)檢測(cè)自噬泡，western blot檢測(cè)抗凋亡蛋白Bcl-XL水平及加用氯喹抑制自噬和si-

6、BECN1干擾觀察吉西他濱對(duì)HepG2細(xì)胞的細(xì)胞毒性。
　　結(jié)果:
　　吉西他濱有效地抑制肝細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞的增殖，呈時(shí)間和濃度依賴性，吉西他濱亦可誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞自噬水平明顯增強(qiáng)，可使抗凋亡蛋白Bcl-XL水平升高，抑制吉西他濱誘導(dǎo)的自噬可以促進(jìn)吉西他濱對(duì)肝細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞的毒性。
　　結(jié)論:
　　吉西他濱作用于人肝細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞抑制其增殖時(shí)，亦可誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞的自噬水平升高，抑制自