GSK3β在模擬缺血再灌注誘導(dǎo)的HepG2細胞自噬中的作用探討.pdf

1、目的：探討GSK3β對模擬缺血再灌注誘導(dǎo)的HepG2細胞自噬的調(diào)節(jié)作用。
　　方法：體外培養(yǎng)HepG2細胞;穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GSK-3β激酶死亡基因(GSK-3beta-KD);模擬肝缺血再灌注損傷;Western blotting檢測下列指標(biāo):1)未轉(zhuǎn)染的HepG2細胞缺血再灌注后的自噬變化(LC3-Ⅱ)和激酶活性(mTOR、GSK-3β)變化關(guān)系;2)穩(wěn)轉(zhuǎn)GSK-3beta-KD基因的HepG2細胞缺血再灌注后的自噬變化和激酶活性變化

2、;3)HepG2細胞缺血再灌注IGF-1干擾后的上述指標(biāo)變化。
　　結(jié)果：1)正常培養(yǎng)的HepG2,細胞模擬缺血120min,再灌注9h內(nèi),LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ表達逐漸增加,9h最高,12h后稍有下降,直到再灌注24h仍維持高水平。磷酸化的GSK-3β、p-GSK-3β/t-GSK-3β比值、磷酸化的mTOR、p-mTOR/t-mTOR比值均在再灌注6h表達明顯增加,12h到達頂峰(p<0.05),24h表達下調(diào)。結(jié)果表明缺血再

3、灌注誘導(dǎo)HepG2細胞自噬增強,同時伴隨GSK-3β磷酸化活性降低,mTOR磷酸化活性增強。2)穩(wěn)轉(zhuǎn)GSK-3βKD的HepG2細胞與未轉(zhuǎn)染的HepG2細胞比較,模擬缺血120min,再灌注9h內(nèi),LC3-Ⅱ表達增加,自噬活性升高,9h之后與未轉(zhuǎn)染HepG2細胞自噬水平無顯著差異;磷酸化的GSK-3β、p-GSK-3β/t-GSK-3β比值表達增加,磷酸化的mTOR、p-mTOR/t-mTOR比值表達下降。穩(wěn)轉(zhuǎn)GSK-3βKD的HepG

4、2細胞IR處理與未IR處理其LC3-Ⅱ含量即自噬水平無變化,磷酸化的GSK-3β、p-GSK-3β/t-GSK-3β比值表達下降,磷酸化的mTOR、p-mTOR/t-mTOR比值表達基本無變化。結(jié)果表明穩(wěn)轉(zhuǎn)GSK-3βKD的HepG2細胞缺血再灌注誘導(dǎo)自噬水平無變化,磷酸化的GSK-3β下降,磷酸化的mTOR比值表達基本無變化。與未轉(zhuǎn)染的HepG2細胞相比,缺血再灌注誘導(dǎo)穩(wěn)轉(zhuǎn)GSK-3βKD的HepG2細胞自噬增強,同時伴隨GSK-3β

5、磷酸化活性降低,mTOR磷酸化活性增強。
　　3)正常培養(yǎng)的HepG2,細胞模擬缺血120min,再灌注時IGF-1處理組與未處理組比較LC3-Ⅱ表達增加,自噬進一步激活,9小時后隨著未處理組自噬活性升高,IGF-1處理組與未處理組自噬活性無明顯差異;磷酸化的GSK-3β、p-GSK-3β/t-GSK-3β比值表達降低,且維持在一個相對穩(wěn)定水平;磷酸化的mTOR、p-mTOR/t-mTOR比值表達再灌1h時降低,之后逐漸升高,9h

6、之后又逐漸恢復(fù)至未加IGF-Ⅰ處理時。結(jié)果表明HepG2細胞缺血再灌注時IGF-1處理自噬進一步增強,同時伴隨GSK-3β磷酸化活性增強,mTOR磷酸化活性先降低,然后又增強,隨自噬活性變化。
　　結(jié)論：1.缺血再灌注誘導(dǎo)HepG2細胞自噬增強,同時伴隨GSK-3β磷酸化活性降低,mTOR磷酸化活性增強。
　　2.與未轉(zhuǎn)染的HepG2細胞相比,缺血再灌注誘導(dǎo)穩(wěn)轉(zhuǎn)GSK-3βKD的HepG2細胞自噬增強,同時伴隨GSK-3β活